背景:古往今来人们一直寻求探索其中的机理并试图去减缓个体衰老的进展。在现在老年人数如此众多的社会现状下,越来越多的研究表明,老龄个体更容易发生多种病理改变从而引发疾病。在所有疾病中,心血管疾病是最先受到增龄影响的,同时增龄过程中细胞老化的很多表现也是心血管病理改变发生发展中的重要影响因素。同时,心血管系统是对于生命个体特别重要的一个维持系统,因此,研究心血管系统的衰老机制,目前来看是一项十分具有应用价值的研究。内膜是组成正常血管结构中核心的部分,而内皮细胞则是参与构建血管内膜的诸多成分中无比重要的一种细胞。血管内皮细胞执行功能包括吞噬异常外来物质及内源性物质、细菌及坏死损伤组织细胞和衰老的组织细胞,还同时与机体多种功能活动相连,其中主要包括保障血管完整,控制物质的通过以及白细胞进出血液的转运、血液凝结(血栓形成和纤维蛋白溶解)、炎症、新血管的形成(血管生成)血管收缩和血管舒张,控制血压等等。血管老化进程之中,其原有正常机能慢慢减退,从而导致管壁硬度加大、增厚、管腔异常缩小或增大的现象。血管的异常都会在不同方面上影响疾病发生和发展。细胞老化正在成为增龄过程中的血管内皮活动衰减的关键机制。但是,尚不完全了解增龄过程中导致血管内皮功能发生不利变化的分子机制。自从上世纪以来,一批又一批的科研人对相关细胞的不断深入探索,大家对辅助性T细胞有了更加全面深刻的认识,发现了一类与传统Th1和Th2、Treg不同的亚集,并最终Th17细胞被定义为Th群中独立的一类细胞子集。Th17细胞是通过分泌与个体活动相关的因子从而影响到个体生命活动的方方面面。其细胞名称的获得也是因为它显著产生IL-17(主要为IL-17A)。Th17细胞是负责触发炎性损伤的承担者,在多种促炎细胞因子共同或独立作用下,在炎症部位极化。IL-17不光本身可首先与炎症起关联,它还通过诱导其他相关因子的表达来诱发炎症反应,从而导致细胞功能失调。Th17是一类在正常情况中和疾病状态下都发挥至关紧要作用的细胞,它参与到个体免疫反应的方方面面,尤其是诱发炎症过程。而在增龄中,慢性炎症往往是不可避免协同产生的。目前有学者提出衰老与炎症的关系,认为,正是衰老过程中发生的炎症一步步刺激机体发生各种反应如氧化应激,从而成为衰老过程的重要原因之一。但是,尚未报道Th17与内皮衰老其中的分子机制。目的:探究Th17/IL-17在小鼠主动脉内皮细胞衰老中的影响及意义,并分析其影响内皮细胞衰老的可能机制,为衰老相关的心血管疾病的诊疗上提供新的思路。方法:本研究以健康C57BL/6J小鼠主动脉内皮细胞为研究对象,首先运用流式细胞术检测了青年中年老年小鼠脾细胞悬液中Th17细胞比例,并使用Western blot分别检测各组的内皮细胞衰老相关蛋白的表达情况。然后用小鼠主动脉内皮细胞系作为体外干预研究对象,用不同浓度IL-17A作用于内皮细胞,观察细胞形态及相关炎症指标改变,通过β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老改变。确定IL-17A作用最适浓度后,采用流式细胞术检测小鼠主动脉内皮细胞的IL-17受体A及衰老表现之一的细胞周期的改变。通过Western blot检测衰老通路蛋白的表达改变进而通过特异性通路抑制剂的联合干预实验探究IL-17A影响衰老的通路机制。结果:(1)C57/B6小鼠增龄过程中,脾细胞悬液的Th17比例逐渐升高,老年鼠脾脏刺激后Th17细胞表达率(2.61±0.34%)显著高于健康青年鼠(0.79±0.17%)和健康中年鼠(1.31±0.21%)(均P<0.01),诱导后老年鼠脾脏刺激后Th17细胞表达率(37.52±3.41%)显著高于健康青年鼠(20.88±1.46%)和健康中年鼠(26.00±1.39%)(均P<0.01)并且主动脉内皮细胞p53、p21、p19、Rb、p16表达呈增加趋势。(2)IL-17A作用于小鼠主动脉内皮细胞后,细胞发生衰老表现,β-半乳糖苷酶染色阳性率显著升高,细胞膜表面IL-17受体A表达明显增加,并且细胞周期检测发现G0/G1期比例显著增加(P<0.05)。(3)IL-17A干预后,发现细胞衰老相关通路蛋白p53、p21、p19、Rb、p16表达明显增加(均P<0.01),并且其上游通路NF-κB p65蛋白、p38 MAPK蛋白和JNK蛋白磷酸化水平均显著升高(均P<0.01);而ERK蛋白表达及其磷酸化水平无明显改变。(4)在IL-17A干预组分别加入NF-κB通路抑制剂PDTC、p38 MAPK通路抑制剂SB203580、JNK通路抑制剂SP600125后,衰老相关通路蛋白表达水平较前者均明显降低(均P<0.01)。结论:Th17/IL-17能够诱导小鼠主动脉内皮细胞发生衰老,其机制可能为Th17分泌的IL-17通过与内皮细胞膜上IL-17受体A结合,从而激活细胞内NF-κB、p38和JNK通路,并进而活化p53/Rb衰老途径诱导内皮细胞衰老。