论文部分内容阅读
目的:(1)探究SCN4B(Voltage-gated sodium channelβ4 subunit)在前列腺癌(PCa)组织以及癌旁组织、细胞中的表达及临床意义;(2)通过慢病毒调控SCN4B的表达后,前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力是否发生改变;(3)探索前列腺癌的EMT进展中SCN4B的潜在影响机制。方法:(1)免疫组织化学(Elivision TMplus方法)染色检测SCN4B在前列腺癌组织及相应的癌旁组织(103例)中的表达情况,分析SCN4B表达水平与前列腺癌患者临床病理特征及预后的关系。(2)实时逆转录-聚合链反应实验(RT-qPCR)和免疫印迹实验(Western blotting)检测SCN4B在三种前列腺癌细胞系(DU145、PC-3、LNCAP)中mRNA和蛋白水平。(3)用慢病毒介导的外源性强制增强或抑制前列腺癌细胞DU145和LNCAP中SCN4B的表达,并用RT-qPCR和Western blotting从mRNA和蛋白水平验证转染效率,检测调控前后SCN4B的表达差异。(4)构建稳定过表达SCN4B的DU145和敲低SCN4B的LNCAP前列腺癌细胞株,通过细胞集落克隆实验、CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验,验证SCN4B对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。(5)通过裸鼠体内成瘤实验,将外源性稳定过表达和敲低SCN4B的两组细胞悬液分别接种于裸鼠皮下,定期观察裸鼠肿瘤生长速度和体积大小并记录,自接种日起喂养35天后颈椎脱臼处死,将肿瘤组织完好的于本体剥离。(6)利用Western blotting和免疫组织化学染色检测调控SCN4B后细胞和动物体内移植瘤EMT标记分子的表达。结果:(1)免疫组织化学染色结果显示,前列腺癌组织的SCN4B着色强度相对比癌旁组织明显偏低,SCN4B着色强度与癌组织的Gleason分级、T分期、M分期和不良预后的发生有显著的相关性(P<0.05)。(2)RT-qPCR和Western blotting结果显示,SCN4B在三种前列腺癌细胞系(高度恶性DU145、中度恶性PC-3、低度恶性LNCAP)中mRNA和蛋白水平表达不同,且随着细胞恶性程度的增高SCN4B表达下降(P<0.05)。(3)SCN4B的过表达显着促进了前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而SCN4B的下调显着抑制了前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。(4)体内实验表明,接种SCN4B过表达组裸鼠形成的移植瘤体积较小;而接种SCN4B敲低组裸鼠形成的移植瘤体积较大,且生长速度明显比过表达组快。(5)Western blotting结果显示,SCN4B过表达组细胞(PCDH-SCN4B)相对于对照组PCDH,前列腺癌细胞PCDH-SCN4B中E-cadherin水平上调,而N-cadherin和Vimentin表达下调,抑制了EMT的进程;相反的,敲低SCN4B组细胞(Sh-SCN4B-1组)和PLOK.1组相比,前列腺癌细胞Sh-SCN4B-1中E-cadherin水平下调,而N-cadherin和Vimentin表达上调,促进了EMT的进程。同时通过对两组肿瘤剥离组织进行免疫组化也验证了上述观点。结论:(1)SCN4B在前列腺癌组织中低表达且与前列腺癌较高的TNM分期和较短的生存期相关。(2)SCN4B可以作为治疗靶点抑制前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力。(3)SCN4B表达上调可抑制前列腺癌中EMT进程。