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目的:探讨胶质瘤TJ905细胞及其干细胞稳转基因Livin短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)皮下种植瘤模型的建立及其对Caspase3,7 m RNA表达的影响。内容:从胶质瘤TJ905细胞中分离胶质瘤干细胞并进行鉴定,分别用Livin-sh RNA和Negative-sh RNA(阴性sh RNA)慢病毒重组质粒转染胶质瘤TJ905细胞及其干细胞,建立相应的裸鼠皮下种植瘤模型,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)、流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)、RT-PCR等技术检测Livin-sh RNA对胶质瘤TJ905细胞及其干细胞皮下种植瘤模型建立及Caspase3,7 m RNA表达的影响。方法:使用无血清培养法联合免疫磁珠法分选胶质瘤TJ905干细胞,并将分选后的细胞通过血清诱导分化、免疫荧光染色(Nestin、GFAP、β-tubulin)进行鉴定,分别将Livin-sh RNA和Negative-sh RNA慢病毒重组质粒转入胶质瘤TJ905细胞及其干细胞内,RT-PCR检测转染效率,建立稳转细胞株;根据细胞是否转染及其所转染质粒类型,将实验分为A组(转染Livin-sh RNA的胶质瘤TJ905细胞组)、B组(转染Negative-sh RNA的胶质瘤TJ905细胞组)、C组(未转染的胶质瘤TJ905细胞组)、D组(转染Livin-sh RNA的胶质瘤TJ905干细胞组)、E组(转染Negative-sh RNA的胶质瘤TJ905干细胞组)、F组(未转染的胶质瘤TJ905干细胞组);CCK-8检测各组细胞增殖变化规律;FCM检测各组细胞周期变化情况;RT-PCR技术检测各组Caspase-3、Caspase-7 m RNA表达情况;建立相应的裸鼠皮下种植瘤模型,观察其成瘤特性,并检测相应肿瘤模型内Caspase-3、Caspase-7 m RNA表达情况。结果:1、胶质瘤TJ905细胞中含有少量的胶质瘤干细胞,其比例约为0.64%-0.91%;2、A组、B组、D组、E组Livin m RNA的相对表达量(相对于C组及F组)分别为0.117±0.017、0.996±0.025、0.193±0.014、1.003±0.033,A组、B组及D组、E组之间差异具有统计学意义(P<0.05);说明Livin-sh RNA可以明显抑制胶质瘤TJ905细胞及其干细胞Livin m RNA的表达;3、CCK-8结果显示,转染48h后A组、B组、C组的吸光度分别为0.828±0.031、1.377±0.026、1.437±0.027,转染72h后A组、B组、C组的吸光度分别为0.896±0.029、1.533±0.035、1.602±0.031,A组与B、C两组之间差异有统计学意义(P<0.05),说明Livin-sh RNA可抑制胶质瘤TJ905细胞的增殖;4、FCM结果显示,A组、B组、C组G0/G1期细胞百分比分别为68.68±2.01、63.14±1.39、62.97±1.79,A组与B、C两组之间的差异有统计学意义(P<0.05);D组、E组、F组S期细胞百分比分别为35.42±2.18、30.33±1.75、30.57±1.49,D组与E、F两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05);说明Livin-sh RNA可阻滞胶质瘤TJ905细胞于G0/G1期,阻滞胶质瘤TJ905干细胞于S期;5、F组的成瘤率为100%,C组的成瘤率为37.5%,两组之间差异有统计学意义(P<0.05),说明胶质瘤TJ905干细胞比胶质瘤TJ905细胞有更强的致瘤性;A组与B组的成瘤率无明显差异,但其肿瘤体积明显降低,D组与E组的成瘤率及肿瘤体积均无明显差异,说明Livin-sh RNA对胶质瘤TJ905细胞及其干细胞的致瘤性无明显影响,但可使胶质瘤TJ905细胞的增殖速度减慢;6、A组、B组、D组、E组Caspase-3 m RNA的相对表达量(相对于C组及F组)分别为5.163±0.364、1.009±0.038、4.076±0.043、1.116±0.031,A组、B组及D组、E组之间差异有统计学意义(P<0.05);A组、B组、D组、E组Caspase-7m RNA的相对表达量(相对于C组及F组)分别为3.067±0.157、1.039±0.022、2.993±0.109、1.045±0.046,A组、B组及D组、E组之间差异有统计学意义(P<0.05);说明Livin-sh RNA可诱导胶质瘤TJ905细胞及其干细胞内Caspase-3、Caspase-7 m RNA的表达。结论:胶质瘤TJ905细胞中含有少量胶质瘤干细胞;Livin-sh RNA能有效抑制胶质瘤TJ905细胞的增殖,促进凋亡相关基因的表达,但对其致瘤性无明显影响;胶质瘤TJ905干细胞有更强的致瘤性和更强的恶性变;胶质瘤TJ905干细胞可能具有与胶质瘤TJ905细胞不同的凋亡途径,因此积极寻找Livin基因相关协同基因作为胶质瘤治疗的靶点才可能治愈胶质瘤。