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本研究利用金标层析试纸技术,以核酸适体和单克隆抗体为识别探针,建立了快速检测Hg2+和高效氯氰菊酯农药的方法。一、基于核酸适配体检测金属Hg(Ⅱ)的胶体金层析技术研究利用“指数式富集配体进化系统(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)”技术筛选获得并改造的核酸适体为标记探针,应用金标层析试纸技术,建立了快速检测Hg2+的胶体金试纸条方法。主要研究内容和结果如下：1.胶体金的制备与优化采用柠檬酸三钠还原法,制备出10nm,15nm,20nm,40nm胶体金,并优化胶体金的最佳离心速度,实验结果表明：10nm,15nm,20nm,40nm的胶体金的最佳离心速度分别是：10000rpm, 10000rpm,8000rpm,6000rpm,离心时间15min。2.基于竞争抑制原理的金标试纸条的设计与组装检测T线设计：以单链核酸适体的互补序列为探针,与目标化合物Hg2+竞争结合金标核酸适体N5,以竞争结合导致金颗粒沉积显色,达到检测目标化合物目的。质控C线设计：以对目标化合物无识别作用的核酸适体的互补序列poly-A为探针,与无识别作用的核酸适体结合导致金颗粒沉积显色,设计试纸条的质控线。结果表明,设计的互补探针中,Hg2+不能竞争核酸适体N5的完全互补序列N5-C-5B,但对部分互补序列MB-1-5具有很好的竞争效果,试验选用MB-1-5。3.试纸条的优化(1)C/T线包被位置优化。实验结果表明：T线的最佳包被位置在距离NC膜下边缘9mm处,C线在其上端平行距离4-5mm处。(2)竞争反应剂量的优化。通过改变金标结合物和MB-1-5的包被量,达到优化检测灵敏度的目的。将活化的1.0OD的核酸适体N5加到5mL胶体金中,浓缩5倍,设计梯度用量包被金标垫；将1.0OD MB-1-5与链霉亲和素反应后,用PBS定容至500μL,设计梯度用量包被T线；结果表明,试纸条的最佳竞争反应包被量为：金标结合物3pL, MB-1-5 1.5-2.0μL,对Hg2+裸眼观察检测灵敏度为3μg/mL。(3)最佳胶体金标记粒径的选择优化。将不同粒径的胶体金与核酸适体结合,用同样的方法制作试纸条,比较试纸条的显色效果和检测灵敏度,筛选出检测效果最好的胶体金标记粒径。结果表明：粒径范围为15-20nm的胶体金检测效果最好,实验选用粒径15nm的胶体金。二、基于抗体检测高效氯氰菊酯农药的胶体金层析技术研究本研究使用以PBA-BSA为免疫原制备的抗拟除虫菊酯类农药单克隆抗体,结合胶体金层析技术,研制快速检测高效氯氰菊酯农药的试纸条。主要研究结果如下：经方法优化后,选用15nm的胶体金标记抗体,金标抗体终浓度为：1.5mg/mL,金标垫包被量为2μL；T线包被PBA-OVA,包被浓度为0.25mg/mL,包被量0.8μL；C线包被的是羊抗鼠IgG,包被浓度为0.1mg/mL,包被量0.8μL；裸眼观察检测灵敏度可达0.1μg/mL。