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目的：观察氯胺酮对吗啡耐受细胞cAMP浓度的影响及小剂量氯胺酮对吗啡耐受细胞δ阿片受体1（DOR1）和NMDA-2B受体（NR2B）表达的影响，探讨小剂量氯胺酮防止吗啡耐受的受体机制。方法：密度为5×105个/ml的PC12细胞接种于六孔板（2ml/孔），采用随机数字表法分为5组（n=5）：0μmol/L氯胺酮组（K0组）、0.5μmol/L氯胺酮组（K0.5组）、5μmol/L氯胺酮组（K5组）、50μmol/L氯胺酮组（K50组）和500μmol/L氯胺酮组（K500组）。采用氯胺酮终浓度分别为0和0.5、5、50、500μmol/L的无血清培养基孵育，孵育时间为48h。采用时间分辨荧光免疫分析法测定细胞内cAMP浓度。密度为5×105个/ml的PC12细胞接种于六孔板（2ml/孔），采用随机数字表法分为5组（n=5）：对照组（Con组）、吗啡组（Mor组）、吗啡＋0.5μmol/L氯胺酮组（M+K0.5组）、吗啡＋5μmol/L氯胺酮组（M+K5组）和吗啡＋50μmol/L氯胺酮组（M+K50组）。Con组：采用无血清DMEM/高糖培养基孵育；Mor组、M+K0.5组、M+K5组和M+K50组：采用吗啡终浓度为10μmol/L及氯胺酮终浓度分别为0和0.5、5、50μmol/L的无血清培养基孵育，孵育时间为48h。采用时间分辨荧光免疫分析法测定细胞内cAMP浓度。密度为5×105个/ml的PC12细胞接种于六孔板（2ml/孔），采用随机数字表法分为4组（n=5）：对照组（C组）、吗啡组（M组）、氯胺酮组（K组）和吗啡+氯胺酮组（M+K组）。C组：采用无血清DMEM/高糖培养基孵育；M组：采用吗啡终浓度为10μmol/L的无血清培养基孵育；K组：采用氯胺酮终浓度为0.5μmol/L的无血清培养基孵育；M+K组：采用吗啡和氯胺酮终浓度分别为10μmol/L和0.5μmol/L的无血清培养基孵育，孵育时间为48h。采用Real-Time PCR法检测细胞DOR1和NR2B表达。结果：①与K0组比较，K0.5、K5和K50组细胞孵育48h，细胞内cAMP浓度差异无统计学意义（P>0.05），K500组孵育48h细胞内cAMP浓度升高（P<0.05）；②与Mor组比较，M+K0.5组、M+K5组和M+K50组细胞内cAMP浓度降低（P<0.05）。与Con组比较，M+K0.5组细胞内cAMP浓度降低（P<0.05）；③与C组相比，M组细胞DOR1表达下降（P<0.01）、NR2B表达增加（P<0.05）、K组细胞DOR1和NR2B表达差异无统计学意义。与M组比较。M+K组细胞DOR1表达升高（P<0.01）、NR2B表达（P<0.05）。结论：①细胞水平小剂量氯胺酮可防止吗啡耐受；②小剂量氯胺酮防止吗啡耐受的受体机制可能与抑制吗啡长时程作用引起的DOR1表达下调及NR2B表达上调有关。目的：观察小剂量氯胺酮对吗啡耐受PC12细胞内Ca2+浓度、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）表达、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）总水平及其磷酸化（pCREB）水平的影响，探讨小剂量氯胺酮抑制吗啡耐受的信号转导机制。方法：密度为5×105个/ml的PC12细胞接种于六孔板（2ml/孔），采用随机数字表法分为4组（n=5）：对照组（C组）、吗啡组（M组）、氯胺酮组（K组）、吗啡+氯胺酮组（M+K组），均采用无血清培养基孵育。C组：不加药物；M组：加入吗啡，终浓度为10μmol/L；K组：加入氯胺酮，终浓度为0.5μmol/L；M+K组：加入吗啡和氯胺酮，终浓度分别为10μmol/L和0.5μmol/L，孵育时间均为48h。采用分光光度计检测游离Ca2+荧光强度，Western blot法检测CaMKⅡ、CREB和pCREB表达水平。结果：①与C组比较，M组Ca2＋浓度升高（P<0.05），CaMKⅡ表达增加（P<0.05），M+K组Ca2＋浓度和CaMKⅡ表达降低（P<0.05）。②四组CREB总水平差异无统计学意义。与C组比较，M组pCREB表达升高（P<0.05），M+K组pCREB表达降低（P<0.05）。结论：小剂量氯胺酮防止吗啡耐受发生与Ca2+浓度、CaMKⅡ表达和pCREB表达的调节有关。