论文部分内容阅读
本文主要对微生物Absidia sp.R9g产芦丁-α-鼠李糖昔酶、Absidiasp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶和Absidi sp.E9r产淫羊藿苷糖苷酶分别进行分离纯化,以及对三种提纯酶的分子量确定、酶性质、酶反应特性等方面进行了研究。三种发酵粗酶液经DEAE-Cellulose DE52柱梯度洗脱得到提纯酶,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了纯度检测及蛋白分子量测定,确定芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶和淫羊藿苷糖苷酶酶蛋白的分子量分别为:66kDa、58kDa、65kDa。对三种提纯酶的酶性质研究表明:芦丁-α-鼠李糖苷酶的最适反应条件为:pH5.0,在pH3.0～7.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=18.09/S+0.146,最大反应速度 Vmax=6.849mmol/L·h,米氏常数 Km=123.904mmol/L。人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的最适反应条件为:pH5.0,在pH3.0～6.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Zn2+、Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=12.906/S+1.447,最大反应速度 Vmax=0.691 mmol/L·h,米氏常数 Km=8.918mmol/L。淫羊藿苷糖苷酶的最适反应条件为:pH4.0,在pH3.0～6.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=19.452/S+0.332,最大反应速度 Vmax=3.012mmol/L·h,米氏常数 Km=58.59mmol/L。对三种提纯酶的酶反应特性的研究表明:芦丁-α-鼠李糖苷酶能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基;人参皂苷-α-鼠李糖苷酶只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基;而淫羊藿苷糖苷酶能够水解葡萄糖基。