【摘 要】
：
研究目的炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）是一种消化道自身免疫炎性疾病,其中包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。目前对IBD的药物治疗有限,患者预后较差。油酸为单不饱和脂肪酸,是地中海饮食中橄榄油的主要成分,具有抑炎的生物学功能。但油酸是否影响炎症性肠病如葡聚糖硫酸钠（Dextra
论文部分内容阅读
研究目的炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）是一种消化道自身免疫炎性疾病,其中包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。目前对IBD的药物治疗有限,患者预后较差。油酸为单不饱和脂肪酸,是地中海饮食中橄榄油的主要成分,具有抑炎的生物学功能。但油酸是否影响炎症性肠病如葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium,DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎及其可能作用机制,目前尚未报道。调节性T细胞（Regulatory T cells,Treg）为一群具有免疫抑制功能的CD4+T细胞亚群,可通过分泌IL-10等抑炎因子以及其它机制,负向调节效应性T细胞的功能,从而维持机体的免疫稳态。Treg细胞发育异常或者功能紊乱,与溃疡性结肠炎等自身免疫性等疾病发病密切相关;增强Treg的分化与功能可减轻肠道炎症。本研究通过在体内构建DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,观察油酸在小鼠溃疡性结肠炎中的治疗作用与Treg的相关性,并进一步通过体外小鼠Treg分化实验,探索油酸在体外对Treg分化的影响及其具体机制,本研究为油酸在溃疡性结肠炎中的补充治疗作用提供新的理论依据。研究方法1.探索油酸对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用:设置实验分组依次为正常对照组、油酸单独处理组、DSS单独处理组以及DSS+油酸共同处理组,检测指标为:小鼠体重、粪便潜血、粪便性状、结肠长度以及病理学变化。2.油酸在DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎中发挥作用的可能机制:利用CBA试剂盒以及ELISA试剂盒检测结肠组织匀浆中促炎细胞因子以及抑炎细胞因子的表达,并利用流式细胞术检测结肠组织CD4+T细胞中Foxp3的表达。3.在蛋白和RNA水平,分别检测油酸对Treg分化的影响:在蛋白水平,利用流式细胞术检测CD4+T细胞中Foxp3的表达情况;在RNA水平,通过q PCR检测细胞中Foxp3的表达。4.检测油酸在Treg分化条件下对增殖的影响:在Treg体外分化条件下,利用CFSE标记na（?）ve CD4+T细胞,采用流式细胞术检测CFSE荧光强度的变化。5.阻断IL-2后对油酸促进Treg分化的影响:有无外源性IL-2刺激和采用anti-IL-2抗体阻断内源性IL-2信号通路的情况下,以流式细胞术检测CD4+Foxp3+T细胞的比例。6.油酸对自噬信号通路的影响:利用免疫印迹法检测LC3-Ⅰ/Ⅱ以及p62水平,同时采用免疫荧光法定量检测LC3斑点的数目。7.阻断自噬后对油酸促进Treg分化的影响:采用自噬抑制剂3-MA阻断自噬,以流式细胞术检测CD4+Foxp3+T细胞的比例。8.油酸对自噬上游信号分子的影响:利用免疫印迹法检测p-AMPK以及p-S6的水平。研究结果1.油酸可缓解DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的体重减轻、便血程度、腹泻程度、结肠长度缩短和结肠组织的病理学变化。2.与DSS单独处理组相比,DSS+油酸共同作用组的结肠组织中促炎细胞因子TNF水平较低。3.与DSS单独处理组相比,DSS+油酸共同作用组的结肠组织中Treg比例较高。4.实验组CD4+Foxp3+T细胞群占CD4+T细胞百分比随着油酸的浓度增加呈剂量依赖性增多,但是溶剂对照组无明显变化;q PCR检测结果显示:与BSA对照组相比,油酸处理后Foxp3的表达显著上调。5.在Treg分化条件下,与BSA对照组相比,油酸刺激不影响T细胞的增殖能力。通过进一步分析发现油酸刺激后,每轮细胞增殖周期中的CD4+Foxp3+T细胞比例均高于BSA对照组。6.无论有无外源性IL-2存在,或用anti-IL-2抗体阻断内源性IL-2信号通路,与对照组BSA相比,油酸均能显著促进Treg分化。7.与对照组BSA相比,油酸可显著上调LC3-Ⅱ水平,同时下调LC3-Ⅰ和p62水平;免疫荧光结果也进一步显示油酸促进LC3斑点数目增加。8.在3-MA未处理组中,与对照组BSA相比,油酸处理后显著上调CD4+T细胞中Foxp3的表达;在3-MA处理组中,与对照组BSA相比,油酸处理后CD4+T细胞中Foxp3的表达无明显差异。9.与对照组BSA相比,油酸可显著上调AMPK磷酸化水平,同时下调m TORC1的活性（S6磷酸化水平）。研究结论1.油酸在体内促进Treg分化,缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎。2.油酸在不影响T细胞增殖的情况下,可促进Treg的体外分化。3.油酸存在非依赖于IL-2信号通路的其它途径促进Treg分化。4.油酸可通过诱导自噬促进Treg分化。5.油酸可活化AMPK以及抑制m TORC1活性。
其他文献
在经济全球化的发展背景下，现代企业面临的竞争越来激烈，优胜劣汰趋势日益显著。自改革开放以来，我国经济建设一直保持着向上发展的势头。2021年，我国的国民生产总值稳居世界前列，经济增长对世界经济增长的贡献率达到了25%。以上的种种成就都离不开企业的发展。伴随着经济全球化的发展趋势越来越明显，企业想要保持长久稳定的发展，就需要进一步加强企业销售管理的有效性。通过改进其中的不足，为企业可持续发展提供有力
＜正＞慢性心功能不全多采取强心、利尿等常规治疗，虽然可以在一定程度上改善患者的临床症状，但是整体效果并不理想。有研究显示，美托洛尔联合曲美他嗪治疗慢性心功能不全预后效果较好，可起到增效作用，提高了患者的生活与生存质量。基于此，本文探讨美托洛尔联合曲美他嗪治疗慢性心功能不全的疗效，现报告如下。1资料与方法1.1临床资料选取2019年5月—2020年4月于我院治疗的80例慢性心功能不全患者作为研究对象
背景:胶质瘤是人颅内最常见的恶性肿瘤,近年来,虽然对胶质瘤的分子生物学特征方面有了较大进展,但在治疗方面仍未取得很大突破。寻找新的重要分子标志物对胶质瘤分子病理分型诊断、治疗及预后判断有深远的意义。本实验室前期研究发现:T细胞来源的蛋白激酶（TOPK）在胶质瘤中高表达,与胶质瘤分级呈正相关,患者的预后呈负相关;TOPK不仅促进胶质瘤细胞的生长,还直接磷酸化ULK1抑制自噬起始进而促进对替莫唑胺（T
目的:在肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）中,肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）一般被认为是M2型。研究表明三羧酸（Tricarboxylic acid,TCA）循环中的琥珀酸对巨噬细胞表型有重要调节作用。巨噬细胞内琥珀酸积累可促进巨噬细胞向M1型极化,琥珀酸介导的巨噬细胞表型重塑为肿瘤治疗提供了新的策略。然而,目
背景:组蛋白翻译后修饰是真核细胞内遗传信息表达的重要调控方式。它能根据细胞生理状态和外界刺激做出相应的调整,精细调控细胞的基因表达谱,以此精准调控细胞内的生命过程。目前,越来越多新的组蛋白修饰类型被发现,例如组蛋白丙酰化、丁酰化、琥珀酰化、丙二酰化、戊二酰化等,并且大量研究证明组蛋白乙酰转移酶可以用不同的酰基辅酶A催化相应的组蛋白酰基化修饰。然而,乙酰转移酶催化多种酰基化修饰的分子机理和对不同酰基
研究背景:Kv2.1类属电压门控钾通道,是目前所知的唯一位于细胞膜上的内质网-质膜接触点（ER-PM junction）链接蛋白。生理条件下,Kv2.1呈自由分散型和微米簇两种定位特征,前者通过电压依赖的K+电流调节细胞的基础电生理活动,后者与胞浆内质网上的蛋白形成稳定的膜接触位点并失去了电导功能。VAPA作为一种支架蛋白,通过自身的特殊位点与Kv2.1通道的非典型FFAT基序结合,共同构成ER-
背景:肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤组织中浸润丰富,M2型TAMs作为其中主要的免疫抑制性细胞,与患者不良预后和治疗抵抗密切相关,通过简单、有效和安全的方法将其重塑为M1型巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用,成为肿瘤免疫治疗的重要策略之一。肿瘤囊泡是肿瘤细胞受到活化或凋亡信号刺激后释放的一种直径在100～1000 nm间的亚细胞结构,具有良好的载体特征。本课题组利用肿瘤囊泡负载化疗药物制备“载药囊泡”,
背景:慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）中,肾纤维化被认为是一种常见的病理结果。肾实质的主要成分之一是肾小管上皮细胞（tubular epithelial cells,TEC）,它们易受不同因素的刺激,是肾纤维化中肌成纤维细胞的重要来源。据文献报道,TRPC6在肾纤维化中表达明显增高,且敲除TRPC6或抑制其活性可明显改善肾纤维化。作为TRPC亚家族的一员,TRP
背景:Slingshot（SSH）是cofilin磷酸酶保守家族的成员,可特异性去磷酸化并激活cofilin,从而使肌动蛋白细胞骨架重塑,在细胞迁移、肿瘤侵袭、有丝分裂、神经元发育和突触可塑性等方面产生重要作用。SSH2作为双特异性磷酸酶家族（DSP）成员,具有一般磷酸酶活性,目前SSH2磷酸酶在2007年解析出催化结构域（P结构域）,对于N端结构域自抑制机制研究、结构解析以及关键氨基酸残基尚不明
研究目的:糖尿病心肌病（DCM）是一种常见的糖尿病（DM）心血管系统并发症,DCM心肌损伤作用的具体机制尚未得到完全的阐明。既往研究提示DM下长期的血脂异常所致的脂毒性对于DCM的发生发展具有重要的作用,因此深入研究脂毒性对心肌损伤的具体机制,对于加深对DCM病理生理机制的理解具有重要的意义。本课题主要研究DCM中,脂毒性对于心肌细胞的损伤作用及其可能的机制。研究方法:采用棕榈酸（PA）刺激人心肌