基于荧光标记发夹式DNA探针的汞离子定量检测技术的研究

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环境污染已成为一个全球性问题,而重金属污染在环境污染中备受关注,汞污染作为较严重的一种重金属污染,对生态环境具有严重的危害。由于汞难被降解,能够在土壤、水、空气中广泛富集,最后经过食物链和大气等进入人体,严重破坏蛋白和酶的活性,造成器官中毒。为了更好的预防汞污染带来的食品安全、疾病危机等问题,开发一种方便快捷、灵敏高效,并且能够实现现场检测,用于临床诊断的检测手段变得越来越重要。在汞离子的检测方法中使用最广泛的属于常规的大型仪器检测方法,如原子吸收光谱法、ICP-MS等方法,这些方法在检测灵敏度和精度上都非常高,但是操作比较复杂,而且耗时也相对较长。而面对日益严峻复杂的汞污染挑战,为了实现对不同环境现场的汞污染检测,研究人员也在不断开发一些新型的Hg2+检测方法。如试纸条法、化学传感器法,纳米材料传感器法以及DNA探针法等,试纸条法是比较简便的一种方法,但只能做定性检测,无法实现定量分析,而其他检测方法基本都是利用化学分子或一些官能团能够结合Hg2+,引起分子结构或者分子的发光特性的改变,最后通过观察吸收谱或光谱来实现对Hg2+的定量检测,相对传统大型仪器方法,这些方法在操作和成本上具有很大改善,但在灵敏度和耗时上仍需改进。结合DNA链特性和荧光共振能量转移技术,在本课题中我们设计了一种发夹式的富含T碱基的DNA链,无需繁琐的温度处理,实现在常温下一步法检测Hg2+。在DNA链两端分别修饰荧光染料Cy3、Cy5,通过观察Cy3荧光强度的变化,将其变化与Hg2+浓度进行线性拟合,我们发现随着Hg2+浓度的增加,Cy3的荧光强度在不断增大,它们之间具有线性相关性,并且线性相关系数为0.9836,而且我们的方法最低检测限能够达到1.3 nM,低于国家饮用水中Hg2+的标准检测限5 nM。随后对方法的选择性进行了研究,加入不同的干扰离子,发现我们的方法对Hg2+具有好的选择性,能够特异性识别Hg2+,实现了对Hg2+的选择性的定量检测。
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