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背景:原发性肝癌是全球最常见的癌症之一,早期肝癌主要且有效的根治方法是手术切除及肝脏移植,但临床发现肝癌时多处于晚期,手术治疗已不适用,化疗往往是中晚期肝癌最常见的治疗手段;然而当前化疗药物的耐药性却是影响化疗疗效的主要问题,因此积极的探索耐药机制及找寻新的治疗靶点尤为重要。LRH-1属于核受体第五家族,目前已有报道证实LRH-1在人体多个器官中表达,本课题组及其他课题组均已证实LRH-1通过多个通路影响肝癌的发生及发展,因此进一步探讨LRH-1是否参与临床常规化疗药物奥沙利铂对肝癌治疗过程中耐药机制的研究,有利于为临床实际耐药问题提供理论基础。目的:通过在两种肝癌细胞系中敲除及过表达LRH-1,分析两种肝癌细胞系在奥沙利铂中的生长及耐药基因表达情况,初步探讨LRH-1调节肝癌对奥沙利铂耐药的作用机制。方法:1、通过TALENs技术敲除LRH-1以及慢病毒介导的方式构建过表达LRH-1细胞系,筛选并获得稳定细胞株模型HepG2LRH-1-以及Huh7LRH-1+,并用PCR或Western Blot方法进行验证。2、通过qPCR法检测不同奥沙利铂浓度下,肝癌细胞株的LRH-1及MDR1的表达情况。3、采用CCK-8法检测不同细胞株在不同奥沙利铂浓度及同一浓度奥沙利铂下的持续增殖能力,并计算其IC50。4、通过qPCR法检测不同奥沙利铂浓度下,过表达细胞与原始细胞株、沉默表达细胞与原始表达细胞株中MDR1的相对表达情况。结果:1、PCR及Western Blot结果显示:成功构建过表达细胞株Huh7LRH-1+以及沉默表达细胞系HepG2LRH-1-。2、PCR结果显示:随着奥沙利铂浓度的升高,HepG2以及Huh7两种肝癌细胞系中LRH-1及MDR1均呈上升趋势,且与浓度具有相关性。3、CCK8结果显示:在正常培养情况或奥沙利铂培养下,HepG2细胞系沉默表达LRH-1后,其连续四天的增殖能力均呈下降趋势;Huh7细胞系过表达LRH-1后,对比原始表达株,其连续四天增殖能力明显增强。HepG2LRH-1-细胞系对比HepG2细胞,其IC50值明显下调;Huh7LRH-1+细胞对比Huh7细胞,其IC50值显著增加。4、PCR结果显示:HepG2细胞中敲除LRH-1,耐药相关蛋白MDR1的表达水平下降;Huh7中过表达LRH-1,耐药相关蛋白MDR1表达水平上升。结论:LRH-1与肝癌的发展及耐药有关,沉默LRH-1可以抑制肝癌细胞的增殖,下调肝癌细胞中耐药蛋白的表达;过表达LRH-1可以促进肝癌细胞的增殖,上调肝癌细胞中耐药蛋白的表达。综上所述,LRH-1参与且增强肝癌对奥沙利铂的耐药性。