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海参(seacucumbers,holothurians)属于棘皮动物门(Echinodermata)海参纲(Holothurioidea),早在几百年前就被我国人民认定为佳肴和滋补营养品。近年来随着海洋生物多糖研究的迅速发展与空前活跃,人们发现海参多糖具有多种生物学功能,在细胞的生命活动中起到重要作用。 本文以刺参为原料,对实验用刺参进行了生物学鉴定;进行了刺参多糖的提取、精制及纯化;将所得纯化多糖对大鼠进行了30天喂养实验确证其对大鼠体重无明显影响,测定了LD50,并对其提高机体免疫力和抗肿瘤活性作用进行了研究。 1、实验用海参品种的鉴定 根据海参标本的体态特征,依据张玺等《中国经济动物志:环节(多毛纲)、棘皮、原索动物》一书,确定了实验用海参为刺参Stichopus japonicus Selenka 1867。 2、刺参中基本物质含量的测定 在营养成分方面刺参具有以下特点:蛋白质含量较高,干品达76.5%;脂肪含量较低,在1%左右;主要含有微量元素Na、Mg、K、P、Fe等。 3、刺参粗多糖的提取、精制与纯化工艺的确定 粗多糖提取采用蛋白酶解和乙醇沉淀技术。实验确定刺参多糖酶解提取的最佳温度为50℃,酶解时间为8小时,加酶量为50U/g刺参,加水量为3.5ml/g刺参。粗多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.42%。 粗多糖精制采用活性炭脱色法去除粗多糖中的色素,通过醋酸钾液沉淀法去除粗多糖中的蛋白类杂质。精制多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.15%。 多糖纯化用SepHadex G-150凝胶柱层析法,用自动部分收集器收集洗脱液。纯化多糖干品的得率为冻煮刺参重的0.09%。 刺参纯化多糖的茚三酮反应为阴性,表明不含蛋白质和氨基酸;琼脂糖电泳图中刺参多糖集中于比较狭窄的一条带,表明纯化多糖有较高的纯度;用浓盐酸水解纯化多糖后做纸层析,结果表明刺参多糖中含有岩藻糖、氨基半乳糖和葡萄糖醛酸。 纯化多糖中多糖含量为69.88%(以葡萄糖计);硫酸基与岩藻糖的含量分别为29.75%和11.68%。 4、急性毒理实验 1) 将刺参多糖经口灌胃喂养大鼠30天,结果表明各组动物体重、体重增加、进食量及食物利用率与对照组相比均无显著性差异(P>0刀5):血红细胞计数、白细胞计数及脏器系数与对照组相比均无显著性差异(P>0刀5);病理组织学检查无异常。 2)刺参多糖的LDS。大于10刀005g/kg上W,根据急性毒性分级,属实际无毒物质。 5、刺参多糖免疫调节功能评价 刺参多糖对小鼠脏器/体重比值无影响,能增强小鼠迟发型超敏反应(DTH)并提高单核一巨噬细胞的碳廓清功能,表明刺参多糖能够增强细胞免疫调节作用和单核一吞噬细胞吞噬功能。 6、刺参多糖抑制小鼠S;80肿瘤实验结果 通过灌胃刺参多糖研究其对小鼠 SI 80皮下实体瘤的抑制效果。同对照组及其它实验组相比,刺参多糖具有很高的抑瘤率,达 79.540(其它几组分别为 96.43O、72.slo和 79.640):在延长as。腹水瘤小鼠的生存时间方面,各实验组同对照组相比均没有显著性差异。