蜱是一类以吸血为生的体外寄生虫,它传播多种人畜共患传染病,给人类健康带来威胁,但迄今为止尚无很好控蜱措施。本研究以褐黄血蜱唾液腺转录组研究为基础,筛选出Haemalin的编码基因片段。借助克隆获得全长,通过原核表达和体外活性实验证明,该蛋白具有抗凝血功能,具有新型药物的开发潜能。采用RACE法,成功克隆出Haemalin缺失的3’端序列,经拼接获得Haemalin基因全长。分析显示,Haemalin(KX094561.1)全长大小607bp,ORF框为423bp;其编码多肽141aa,信号肽长16aa,分子量大小约14KDa;具有2个Kunitz结构域。将ORF克隆pGEX-4T-1载体,构建重组质粒,转染BL21(DE3)细胞,经诱导表达出重组蛋白;SDS-PAGE电泳表明,该蛋白具有较好的水溶性;Western Blot证明,该蛋白为重组蛋白,分子量大小40KDa(GST标签蛋白分子量为26KDa)。将阳性菌液超声裂解,GST亲和层析柱纯化,产物进行抗凝机制试验,结果显示,Heamalin融合蛋白能够抑制PT、APTT,即Heamalin通过外源性和内源性凝血因子而阻止血液凝固。