卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其中90％是上皮性卵巢癌,在妇科肿瘤中致死率最高。主要原因是缺乏早期诊断手段及产生化疗耐药。DNA甲基化作为表观遗传的主要方式之一,其异常与肿瘤发生及化疗耐药之间的关系已倍受关注。BRCA1为乳腺癌.卵巢癌易感基因1,其突变与50%～90%的遗传性卵巢癌的发病和化疗效果相关;而临床上90%～95%的卵巢癌为散发性,在散发性的卵巢癌,其基因突变率仅为0～0.1%,因此,BRCA1甲基化可能在卵巢癌发病及化疗耐药中具有重要意义。本研究拟采用Real time PCR、测序RT-PCR、MTT、western blot、裸鼠荷瘤模型等技术和方法,研究BRCA1甲基化在卵巢癌早期诊断及化疗敏感性中的作用。　　 第一部分,探讨卵巢癌中BRCA1甲基化状态与卵巢癌发生的相关性。　　 方法:Real time PCR和测序法检测卵巢癌组织、细胞系及血浆中BRCA1甲基化水平,分析BRCA1甲基化水平与与临床病理联系,及在卵巢癌早期诊断中的价值;Realtime PCR及western blot检测BRCA1的表达水平:体内荷瘤试验验证。　　 结果:卵巢癌组织和细胞系中的BRCA1甲基化水平高于正常卵巢组织/细胞,且随着病理分期的升高而显著增加;卵巢癌Ⅰ期和Ⅱ期卵巢癌患者的BRCA1甲基化水平无差异。卵巢癌Ⅱ、Ⅲ期患者血清中BRCA1的甲基化水平高于正常人及良性卵巢肿瘤患者,其中Ⅲ期患者血清BRCA1甲基化水平明显高于Ⅰ和Ⅱ患者,而Ⅰ患者与健康人、卵巢良性肿瘤患者BRCA1甲基化水平无明显差异。去甲基化处理使荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显缩小。　　 结论:卵巢癌中BRCA1低表达与BRCA1高甲基化状态有关,但血清BRCA1甲基化水平尚不能作为早期诊断标志物。　　 第二部分,探讨卵巢癌BRCA1甲基化状态与卵巢癌顺铂敏感性的关系及对荷瘤裸鼠化疗效果的影响。　　 方法:通过检测BRCA1在卵巢癌耐药及其亲本细胞,分析BRCA1甲基化与化疗耐药的关系。建立不同的裸鼠卵巢癌腹腔化疗模型,比较甲基化和去甲基化处理对裸鼠化疗效果的影响。　　 结果:卵巢癌DDP敏感细胞甲基化水平明显高于耐药细胞,去甲基化处理使卵巢癌细胞对DDP敏感性降低。　　 结论:BRCA1高甲基化与卵巢癌化疗敏感性相关。　　 第三部分,BRCA1甲基化可能参与的信号通路。　　 方法:Western blotting检测卵巢癌细胞系SKOV3,COC1,COC1/DDP,COC1+5-Aza-Dc中DNA Damage通路(p-BRCA1,P-P53,P-ATM,P-ATR,P13K/Akt,beta-Catenin/Wnt通路的变化。　　 结果:卵巢癌细胞中存在AKT蛋白和P-Akt的表达,但细胞间表达水平无明显差异,且P-Akt呈弱表达;COC1细胞中P-BRCA1明显低于SKOV3,COC1+5-Aza-dC及COC1/DDP细胞(P＜0.05);卵巢癌细胞中存在弱表达的P-ATM及p-ATR;SKOV3,COC1+5-Aza-dC及COC1/DDP细胞中可检测到弱表达的P-p53,但无明显差异,COC1细胞中未检测到P-p53;卵巢癌细胞SKOV3,COC1/DDP,COC1+5-Aza-dC存在β-Catenin表达,但表达强度无明显差异,COC1细胞中未检测到β-Catenin的表达。　　 结论:BRCA1甲基化可能通过P53及beta-Catenin/Wnt信号通路,在卵巢癌发生及化疗敏感性中发挥重要作用。