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在肿瘤发生发展过程中,基因功能的改变包括基因机制(genetic mechanism)和后生机制(epigenetic mechanism).DNA甲基化是目前已知哺乳动物细胞的唯一后生改变.抑癌基因的表达是受其操纵子所调控的,DNA序列中5位胞嘧啶(C)的甲基化状态在调节基因表达中起着重要作用,其中启动子区CpG岛甲基化是导致抑癌基因失活的重要原因.DNA甲基化已成为研究热点,有关研究方法发展迅速.主要的甲基化检测方法有:DNA印迹,限制性内切酶-PCR,测序法,甲基化特异的PCR(MSP),甲基化敏感性单链核苷酸引物延伸(Methylation-sensitive single nucleotide primer extension,MS-SnuPE),变性高效液相色谱法(DHPLC)和微阵列技术(DNA Microarray).该课题的研究对象为胃癌p16基因启动子区和一部分外显子1的CpG岛.p16抑癌基因的功能与细胞周期调节密切相关,它是细胞周期的一种负性调控因子,阻止细胞生长分裂.p16基因甲基化在某些肿瘤中表现出早期事件的特性,使p16基因甲基化的检测具有早期诊断价值.我们将半巢式MSP的方法用于60例胃癌p16基因甲基化的初步检测.半巢式MSP是一种改进的MSP.结果表明用半巢式MSP检测的甲基化发生率为61.7％(37/60),比单独采用MSP提高了18.4％,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化发生的不同模式.为了定量研究肿瘤中甲基化的发生情况,我们绘制了不同位点的荧光强度标准曲线图,制备了p16基因甲基化检测型基因芯片.每相邻2或3个CpG位点设计一组探针,每组探针包括分别与完全甲基化DNA和完全非甲基化DNA互补的两条探针.将甲基化纯阳性DNA和完全不发生甲基化的阴性DNA按不同比例混合,与固定好9组探针的基因芯片杂交,得到不同位点的荧光强度标准曲线图.我们得到了对应于9组探针(23个CpG位点)的9条荧光强度标准曲线,均呈很好的线性关系.实现了对临床胃癌样本的芯片定量分析,结果与半巢式MSP的检测结果一致.根据各CpG位点的荧光强度标准曲线图,我们对克隆体的甲基化模式作了推测,与测序结果一致.这些结果表明我们制备的甲基化定量检测型芯片是切实可行的,具有良好的应用前景.