冷水鱼肠道乳酸菌多样性及产细菌素乳酸菌特性研究

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目的:乳酸菌细菌素是一类具有抑菌活性的多肽或蛋白,在胃肠道中能够被蛋白酶降解,具有较高的安全性,对于近缘菌株和一些食源性病原菌及腐败菌具有较好的抑制效果,作为一种潜在的天然的生物型防腐剂应用于食品工业具有极大的应用潜能。本研究的主要目的是对采集自新疆北部地区和黑龙江流域的野生冷水鱼肠道的乳酸菌进行分离和鉴定,分析其肠道中乳酸菌的多样性,并对冷水鱼肠道产细菌素乳酸菌进行筛选和生物学特性的研究。方法:通过传统培养的方法应用MRS、Elliker、M17培养基、胆汁七叶苷叠氮钠培养基和乳酸杆菌选择性培养基对冷水鱼肠道内容物及其粘膜样品中的乳酸菌进行分离,并对肠道中乳酸菌的多样性进行分析。采用琼脂孔扩散法筛选产细菌素乳酸菌菌株,进一步研究不同温度,pH值,表面活性剂及蛋白酶对其细菌素活性稳定性的影响。结果:从21种不同的野生冷水鱼肠道样品中共分离得到195株纯培养物,经鉴定乳酸菌菌株149株,基于菌株16S rDNA序列构建的系统发育分析显示,它们分别隶属于Carrobacterium(73)、Lactobacillus(70)、Bacillus(1)和Leuconostoc(5)四个属。对分离的149株乳酸菌进行抑菌活性的筛选,结果显示,经排除有机酸和过氧化氢干扰后,有20株乳酸菌对李斯特菌仍具有较强的抑菌活性,且经蛋白酶处理后完全丧失活性,表明其抑菌组分物质具有蛋白质性质。从中挑选出3株对李斯特菌具有显著抑菌活性的产细菌素乳酸菌M17-ZLYM-4、M17-ZLYM-3和BS-ZLYM-4进一步研究其产细菌素特性,结果表明,这三株菌株产生的细菌素具有较好的热稳定性(24°C~100°C),表面活性剂稳定性以及相对比较宽的pH稳定范围,经过蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶处理后完全失去其抑菌活性,且最适生长温度在24°C左右,属于产细菌素耐低温乳酸菌。结论:分离自新疆北部地区和同纬度黑龙江流域的野生冷水鱼肠道的可培养乳酸菌具有相对丰富的多样性,其中Carrobacterium属和Lactobacillus属的乳酸菌在数量上占据优势;经抑菌活性的筛选和初步鉴定,20株菌株可能是产细菌素乳酸菌,其中产细菌素乳酸菌M17-ZLYM-4、M17-ZLYM-3和BS-ZLYM-4具有较好的热稳定性,相对比较宽的pH稳定范围(pH2~9),对蛋白酶敏感,最适生长温度在24°C左右,属于耐冷菌范畴,可以作为一种生物型防腐保鲜剂用于食品保鲜领域。
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