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本实验以从屠宰场收集到的黄牛卵巢中分离得到的腔前卵泡卵母细胞为材料,采用普通微滴法和多聚赖氨酸铺层法对黄牛腔前卵泡进行体外培养研究,结果如下:
比较了机械分离法和酶结合机械法分离腔前卵泡卵的效果,用机械分离法每个卵巢回收的卵泡数平均为12.6±3.6个(共分离卵巢15个),极显著低于酶结合机械法的28.2±8.6个(共分离卵巢15个)(P<0.01);而回收的正常卵泡两种方法间差异不显著(P>0.05)。综合比较表明分离腔前卵泡卵的效果酶结合机械法优于机械法。
实验筛选了适宜的基础培养液和牛腔前卵泡体外培养的方法。
在实验筛选出的适宜基础培养液中添加EGF50ng/L、IGF-175ng/L时腔前卵泡的存活率最高,达到66.4%,极显著高于对照组的44.6%(P<0.01),而卵母细胞直径的平均增幅也达到最大(45.92μm),显著高于对照组的28.56m(P<0.05)。结果表明,联合添加EGF、IGF-1能够促进腔前卵泡体外培养的存活率和卵母细胞的生长。
在实验筛选出的适宜基础培养液中添加了不同剂量的FSH、17β-E2以探讨其对牛腔前卵泡体外培养的影响。
在实验筛选出的适宜基础培养液中添加50mg/LEGF+75mg/LIGF-1+0.25mg/LFSH+1mg/L17β-E2体外培养腔前卵泡,结果表明,培养12天卵母细胞直径平均增幅达到62.84μm,而培养12天后腔前卵泡成腔率为8.76%。说明DMEM+5.00mg/胰岛素+5.00mg/L转铁蛋白+5.00μg/L硒+2.00mmol/LcAMP+2.00mmol/L谷氨酰胺+2.50mmol/L次黄嘌呤+5%血清+50mg/LEGF+75ng/LIGF-1+0.25ng/LFSH+1mg/L17β-E2是较好的腔前卵泡培养液。