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鸭α-干扰素成熟蛋白基因原核表达载体的构建、表达及生物活性研究根据本课题组克隆、构建的PBV220-IFN（ORF）序列，利用permer5．0设计引物扩增出成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体，测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+，转化宿主菌BL21（DE3），经IPTG诱导后获得高效表达。表达的重组蛋白分子量大小约37 KDa，以包涵体形式存在，占菌体总蛋白的30％。重组蛋白经镍金属螯合介质填料（Ni-MIAC）后得到纯化。利用稀释复性和柱上复性两种方法对包涵体进行复性，以在DEF上抗VSV的生物学活性效价检测其效价。稀释复性中，通过添加L-Arg使鸭α-干扰素成熟蛋白得到初步复性，表现出800U／mg的抗VSV活性，对柱上复性的鸭α-干扰素成熟蛋白，得到比活力为12800U／mg的DuIFN-α成熟蛋白。利用定量PCR的方法对受30U（15U／ml）DuIFN-α成熟蛋白保护的鸭胚层纤维细胞（DEF）中的DPV强毒进行抗病毒活性检测。结果显示：在DPV感染后15 h内，重组鸭α-IFN抗DPV组的病毒核酸拷贝数与不加鸭α-IFN的阳性对照组之间差异不显著（P＞0.05）；从23h开始鸭α-IFN保护组的核酸拷贝数低于阳性对照组并在感染后47h-55h其拷贝数差异达到最大，差异显著（P＜0.05）；与阳性对照组的DPV拷贝数相比，鸭α-IFN保护组在55h时能减少病毒108.83个核酸拷贝数，相对抑制率为80％。表明重组鸭α-IFN能明显抑制对数期的DPV复制，具有进一步临床应用的潜力。鸭α-干扰素ORF序列的原核表达及生物活性研究根据本课题组克隆、构建的PBV220-IFN ORF序列，利用EcoRⅠ、SalⅠ双酶切其ORF后连接到原核表达载体pET32a+，转化宿主菌BL21（DE3），经IPTG诱导后获得表达。表达的重组蛋白分子量大小约42 KDa，以包涵体形式存在。利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化和柱上复性。对复性的鸭α-干扰素ORF，利用鸭α-干扰素ORF在DEF上抗VSV的效价检测其生物学活性。结果表明：经Ni-MIAC纯化-复性后得到比活力为450U／mg的DuIFN-αORF蛋白。比较经Ni-MIAC复性后鸭α-干扰素ORF和鸭α-干扰素成熟蛋白抗VSV的活性，表明鸭α-干扰素ORF上的信号肽序列不利于该蛋白的复性。