红曲E-70及与阿霉素联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖影响

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目的:  从天然红曲中提取有效部位群“红曲E-70”并初步建立质量控制的指纹图谱;探讨红曲E-70是否能抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,与红曲降血脂成分洛伐他汀及抗癌药阿霉素进行比较;探讨红曲E-70与阿霉素最大无效量联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用是否有协同作用;探讨红曲E-70与阿霉素最大无效量联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期影响;了解其抗癌作用是否有诱导凋亡作用。  方法:  制备红曲E-70,采用HPLC法测定通过高效液相检测红曲E-70的洛伐他汀含量;采用MTT法测定红曲E-70、洛伐他汀、阿霉素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,筛选出阿霉素最大无效量;红曲E-70与阿霉素最大无效量联合用药对MCF-7增殖的影响;对应用流式细胞仪检测红曲E-70及其与阿霉素最大无效量联合用药作用于MCF-7的细胞周期分布;Hoechst33342染色观察红曲E-70及其与阿霉素最大无效量联合用药作用于MCF-7细胞的细胞形态;分光光度法检测检测红曲E-70及其与阿霉素最大无效量联合用药对MCF-7细胞Caspase-3活性的影响。  结果:  1.提取红曲E-70的操作方法简单,采用高效液相色谱法测得每1mg红曲E-70(甲醇溶解)中含有洛伐他汀0.006mg,每1mg红曲E-70(水溶解)中含有洛伐他汀0.001mg。  2.经体外细胞实验,红曲E-70的有效成分抑制MCF-7增殖;通过前期高效液相实验检测红曲E-70当中的洛伐他汀含量,红曲E-70最小有效量中,1ml红曲E-70含有洛伐他汀0.001μg,洛伐他汀含量是红曲E-70的千分之一。经换算后,对应红曲E-70的加入量作用于MCF-7,红曲当中的洛伐他汀含量对MCF-7的增殖抑制作用不明显,红曲E-70抑制作用于人乳腺癌MCF-7细胞比洛伐它汀更好;本实验筛选出阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大无效量为0.0001μmol/L。  3.阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大无效量为0.0001μmol/L,红曲E-70在50~150μg/ml浓度范围与阿霉素最大无效量0.0001μmol/L联合用药,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与红曲E-70组无统计学意义(P>0.05)。  4.红曲E-70及其与阿霉素最大无效量联合用药都是使细胞停滞在G1期,控制进入S期的检测点(G1期检测点),防止受损的DNA和未完成复制的DNA进入有丝分裂,S期细胞减少,说明肿瘤增殖活性己有所减弱,从而达到抗肿瘤的目的;经Hoechst33342染色,荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而类似凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白。红曲E-70组和红曲E-70与阿霉素联合用药组随着浓度的增大,细胞凋亡的趋势增加;不同浓度红曲E-70及其与阿霉素联合用药作用于MCF-7细胞24h后,Caspase-3的活力与对照组有统计学意义(P<0.05)。  结论:  1.高效液相色谱法测得每1mg红曲E-70(甲醇溶解)中含有洛伐他汀0.006mg,每1mg红曲E-70(水溶解)中含有洛伐他汀0.001mg,用水溶解红曲E-70中的洛伐他汀含量是红曲E-70的千分之一。  2.红曲E-70抑制MCF-7增殖,洛伐他汀对应红曲E-70的加入量作用于MCF-7,其对MCF-7的增殖抑制作用不明显,可能不是红曲E-70主要抗肿瘤成分。阿霉素抑制人乳腺癌MCF-7增殖的最大无效量为0.0001μmol/L,与红曲E-70联合用药对MCF-7增殖影响,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与红曲E-70组无统计学意义(P>0.05)。  3.红曲E-70及其与阿霉素最大无效量联合用药都是使细胞停滞在G1期;经Hoechst33342染色,随着浓度的增大,细胞凋亡的趋势增加;Caspase-3的活力增加。
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