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植物凝集素(Lectin)是来源于植物中具有高度特异糖结合活性的蛋白质或糖蛋白。植物凝集素的糖结合专一性决定了其在相关作用及性质方面的诸多优势。本研究所用红芸豆植物凝集素(Red kidney bean lectin,RKBL,phytohemagglutinin,PHA)是从云南本地产红芸豆中提取的。已有的研究表明,芸豆植物凝集素在LD-50,致畸作用,不同方式给予芸豆PHA对淋巴细胞的转化、急性毒性、长期毒性、生殖毒性试验等方面都表现了很高的安全性。随着对芸豆植物凝集素相关作用机理的深入研究以及应用领域的不断挖掘探索,人们开始关注芸豆植物凝集素在体内的吸收、分布、代谢和排泄等药代动力学性质。另外,作为药物应用,还需要了解芸豆植物凝集素的溶血性、过敏性及致癌性等方面的性质,但已有的相关文献资料很少或缺如。因此,本学位论文从溶血性、过敏性、致癌性和药代动力学方面对红芸豆植物凝集素(RKBL)进行研究。本研究的主要目的:以昆明白小鼠为实验动物,探讨RKBL在溶血性、过敏性、致癌性方面的性质,并进行初步的药代动力学研究。本研究的方法:1、采用肉眼观察法,结合分光光度法及红细胞计数法,观察红芸豆植物凝集素的溶血性,并利用已使用较长时间和使用较多的外用避孕制剂——壬苯醇醚(Nonoxynol,N-9)进行对比实验观察,研究RKBL的溶血性。2、通过隔天皮下注射制备致敏血清,皮内注射进行被动致敏并于48h后静脉注射进行激发三个阶段,观察小鼠背部皮肤蓝斑部分,探究RKBL的过敏性。3、通过雌鼠阴道、雄鼠直肠连续给药的方式,研究RKBL的致癌性。4、对RKBL进行FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)荧光标记,并进行鉴定。5、采用阴道或直肠,静脉的给药方式,探究标记FITC的RKBL在小鼠体内的吸收、分布、代谢及排泄。结果:1、体外溶血试验中,RKBL组肉眼观察无明显溶血,分光光度计法测定溶血率均低于5%。壬苯醇醚对照组混合均匀后即发生溶血。采用红细胞计数法测定溶血率中,因RKBL本身能够凝集红细胞,且未凝集的游离红细胞个数较少,在显微镜下无法计数,因此不能代表实际的红细胞数目。通过机械处理后红细胞破裂而发生溶血。2、小鼠全身被动皮肤过敏实验中,雄性小鼠各组的IgE含量明显低于雌性小鼠的,各组雄鼠间存在显著差异,而雌鼠组间差异不显著。激发后除阳性对照组动物有蓝斑外,其余各组均无。3、在已完成的6个月致癌性试验中,RKBL组小鼠生长情况稳定,无特殊组织病理现象,体重、脏器系数、血液学及生化检验与对照组相比,均无明显差异。4、RKBL可被FITC标记。5、药代动力学实验中,给予FITC-RKBL后,在血浆、心脏、胃、肝脏、肾脏、肾上腺、肺、脑、脂肪、胆汁、膀胱、睾丸、附睾(子宫、卵巢)、小肠和大肠等器官和组织均有RKBL分布;RKBL可通过胆汁和尿液排出。结论:1、RKBL无溶血发生,可应用于临床。但可凝集红细胞,静脉注射时需注意浓度和滴入速度。此外,红细胞计数法测定溶血率不适用于类似凝集素的物质。2、RKBL对小鼠的被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用,雌雄小鼠均未表现出过敏反应,提示使用安全可靠。3、RKBL对小鼠的致癌性实验结果显示是安全的。4、FITC-RKBL可作为探针,用于RKBL的药代动力学研究。5、FITC-RKBL给药后可分布于心脏、胃、肝脏、肾脏、肾上腺、肺、脑、脂肪、膀胱、睾丸、附睾(子宫、卵巢)、小肠和大肠中。排泄途径可通过肝脏代谢或收集后通过胆汁排泄以及通过肾脏从尿液排出体外。