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研究目的:研究SHIP-1(含SH2肌醇5磷酸酶1,SH2-containing inositol 5’-phosphatase 1)对单纯疱疹病毒性角膜炎免疫炎症的调控作用,探讨SHIP-1对单纯疱疹病毒性角膜炎的治疗和预后的影响。研究方法:选取6～8周龄的雄性近交系C57BL/6小鼠,通过角膜划痕接种法(角膜上划#字划痕再滴入病毒液)建立小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎感染模型,观察小鼠单疱病毒性角膜炎模型不同时间的临床表现。在角膜单疱病毒感染造模后第14天给予SHIP-1拮抗剂或SHIP-1激动剂干预,拮抗剂干预是予以结膜下注射5微升SHIP-1拮抗剂3α-Aminocholestane(氨基胆甾烷),对照组予以相同剂量溶剂小鼠结膜下注射。激动剂干预是予以结膜下注射5微升SHIP-1激动剂Rosiptor(罗西普托),对照组予以相同剂量溶剂对小鼠结膜下注射。拮抗剂和激动剂干预后第1、3、7、14天进行随访,并根据角膜溃疡面积、深度、溃疡形态及角膜新生血管进行临床评分。干预后第14天,小鼠采取脊髓脱臼法致死,取角膜进行冰冻切片免疫荧光染色观察角膜中CD4+细胞、SHIP-1,取角膜冰冻切片HE染色观察组织形态,取脾脏、淋巴结、三叉神经节行流式细胞术检测CD4+细胞和CD8+细胞。结果:1.小鼠角膜单纯疱疹病毒感染后第1天,角膜表面粗糙,透明,虹膜纹理清楚,瞳孔可见;感染后第3天,角膜表面粗糙,部分角膜混浊,虹膜可见,瞳孔窥不清;感染后第7天,角膜表面粗糙,大部分角膜混浊,并且密度增大,呈灰白色的浑浊,角膜缘可见新生血管,虹膜部分可见,瞳孔窥不清;感染后第14天,角膜中央溃疡灶白色致密,覆盖整个瞳孔区,虹膜不见,新生血管长至瞳孔区,可有前房积血或前房积脓。2.小鼠SHIP-1拮抗剂处理后第14天,小鼠角膜HE染色可见实验组角膜上皮仍不光滑完整,角膜基质水肿,炎症细胞大量浸润;对照组角膜上皮较光滑完整,角膜基质轻度水肿,少量炎症浸润。免疫荧光染色显示实验组较对照组CD4+细胞浸润增加,SHIP-1于角膜上皮下和基质表达少。特异性拮抗了SHIP-1之后可加重小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎炎症反应。处理后第14天,两组间临床评分(8.67±1.03 vs.6.33±0.52,t=5.534,p=0.003)和角膜新生血管评分(7.83±0.41 vs.5.33±1.63,t=3.478,p=0.018)的结果显示两组差异有显著性。小鼠颈部淋巴结和脾脏流式细胞计数发现实验组中CD4+和CD8+细胞数高于对照组(峰值1.6K vs.675,峰值1.7K vs.550;峰值24K vs.4K,峰值9.5K vs.1.5K)。3.小鼠SHIP-1激动剂处理后第14天,HE染色可见实验组角膜上皮光滑完整,角膜基轻度水肿,炎症细胞少量浸润;对照组角膜上皮较光滑完整,角膜基质轻度水肿,大量炎症浸润。免疫荧光染色显示实验组较对照组CD4+细胞浸润少,SHIP-1于角膜上皮下和基质表达多。特异性激动了SHIP-1之后可减轻小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎炎症反应。处理后第14天,两组间临床评分(4.50±0.55 vs.6.50±0.55,t=-5.477,p=0.003)和角膜新生血管评分(2.17±1.72 vs.3.38±0.41,t=-2.712,p=0.042)的结果显示出显著性统计学差异。通过对小鼠颈部淋巴结进行流式细胞计数,发现实验组中CD4+和CD8+细胞数低于对照组(峰值55 vs.140,峰值45 vs.110);通过对小鼠脾脏进行流式细胞计数,发现实验组中CD4+细胞数稍高于对照组(峰值275 vs.210),CD8+细胞数稍高于对照组(峰值160 vs.125)。结论:1.通过对SHIP-1的调控可以干预单纯疱疹病毒性角膜炎的炎症发展过程。2.SHIP-1对单纯疱疹病毒性角膜炎的作用可能是通过对CD4+T细胞的调控完成的。