【摘 要】
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目的:基于Wnt/Ca2+信号通路,探究中药方剂桃红四物汤在大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤(Limb Ischemia Reperfusion Injury,LIRI)过程中,是否通过抑制三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达来减轻炎症反应。方法:将48只2月龄雄性SD大鼠按随机数表随机分为正常对照组N(normal)12只,缺血再灌注组模型组M(model)12只、桃红四物液组T(taohongsiwuye
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目的:基于Wnt/Ca2+信号通路,探究中药方剂桃红四物汤在大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤(Limb Ischemia Reperfusion Injury,LIRI)过程中,是否通过抑制三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达来减轻炎症反应。方法:将48只2月龄雄性SD大鼠按随机数表随机分为正常对照组N(normal)12只,缺血再灌注组模型组M(model)12只、桃红四物液组T(taohongsiwuye)12只和阻断剂组B(block)12只等4个大组,各大组再以缺血再灌注后第2、4、6、8小时等时间点分为4个小组,所有实验大鼠分别于各时间点处死并取材检验,采用HE染色观察腓肠肌细胞形态,DAPI荧光染色法检测腓肠肌细胞核,ELISA法检测炎症因子的表达,实时定量PCR和western-blotting检测IP3R的表达。结果:HE染色观察腓肠肌细胞形态:HE染色观察腓肠肌细胞形态:正常对照组N组大鼠腓肠肌纤维组织结构排列整齐,呈长索状,肌纤维结构清晰,可见丰富肌髓。每条肌纤维中课件紧密相连于肌膜内表面的几个细胞核,核大小均匀,着色均匀,无异常改变;缺血再灌注组模型组M组课件腓肠肌纤维紊乱,呈不规则形,肌纤维水肿增厚,呈片状排列。肌肉纤维完整性、持续破坏、肌肉纤维变薄、肌纤维间裂缝扩大、肌肉细胞破坏和肌肉纤维炎性浸润;桃红四物液组T组腓肌观察仍有肠肌纤维炎性浸润,但相比模型组程度较轻;阻断剂组B组腓肠肌纤维可见细胞不同程度受损,肌纤维遭受轻度破坏,但纤维间排列整齐,炎性浸润不明显。DAPI荧光染色法检测腓肠肌细胞核:(1)与正常组比较,模型组凋亡细胞数量明显偏高,荧光强度明显偏强;与正常组比较,桃红四物液组凋亡细胞数明显减少,荧光强度明显偏强。(2)与模型组比较,桃红四物液组凋亡细胞数和荧光强度明显偏低;与模型组比较,阻断剂组凋亡细胞数和荧光强度明显偏低。ELISA法检测IL-1β、IL-6和TNF-α的表达:(1)与正常组相比,模型组、桃红四物液组、阻断剂组三组大鼠炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α分泌的巨噬细胞炎症因子明显增强。(2)与模型组相比,桃红四物液组炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均明显降低,阻断剂组炎症因子IL-1β和TNF-α的表达明显低于桃红四物液组,而桃红四物汤组和阻断剂组IL-6浓度无显着性差异。实时定量PCR和western-blotting检测IP3R:通过制造缺血再灌注损伤模型后,IP3R蛋白均显著上调高于正常水平,但桃红四物液组与阻断剂组经桃红四物液预处理后,IP3R的表达明显下调,甚至降至正常组水平。结论:在骨骼肌缺血再灌注损伤的Wnt/Ca2+信号通路中,桃红四物汤可以通过抑制IP3R的表达减轻炎症反应,而缓解缺血再灌注损伤。
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