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背景及目的:慢性牙周炎是由牙周致病菌及宿主免疫防御反应相互作用而导致的慢性感染性疾病,特点主要为牙龈炎症、临床附着丧失以及牙槽骨吸收。2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)是以血糖升高为主要表现的一类慢性代谢紊乱疾病,机体长期处于高糖状态导致机体各个系统病变。糖尿病是牙周病的主要危险因素,在糖尿病伴牙周炎患者,持续的高血糖状态引起体内多种蛋白质非酶糖基化,由此形成的晚期糖基化终产物(advanced glycationend products,AGEs)在糖尿病伴牙周炎的发病机制中起重要作用。近来研究发现,巨噬细胞(macrophages,M_φ)作为机体固有免疫系统的重要组成部分,在牙周组织中可发挥防御功能,维持牙周组织稳态;另外还可通过释放促炎因子作用于机体,导致牙周组织破坏及牙槽骨吸收,是牙周炎发病机制中必不可少的免疫细胞成分。研究显示,在正常牙龈组织和牙周炎牙龈组织中均可检测到M_φ。钙卫蛋白(calprotectin,S100A8/A9 complex)也称钙防卫蛋白,主要由单核细胞、中性粒细胞和M_φ分泌,是由S100A8(MRP-8)与S100A9(MRP-14)以钙离子依赖性方式而形成的异源二聚体S100A8/A9蛋白复合物。研究发现,钙卫蛋白与多种炎症性的疾病、自身免疫性疾病、T2DM及牙周炎都密切相关。在生理情况下,钙卫蛋白在正常机体的龈沟液、血清、唾液中都有少量表达,在牙周炎患者尤其在糖尿病伴牙周炎患者的牙龈组织和血清中,S100A8/A9的表达高于牙周健康者的牙龈组织和血清。但S100A8、S100A9水平在T2DM表达机制尚不清楚,有关S100A8/A9在人2型糖尿病伴牙周炎患者的牙龈组织M_φ上表达尚未见报道。本研究通过观察2型糖尿病伴牙周炎患者的牙龈组织中巨噬细胞S100A8、S100A9的表达情况,探讨巨噬细胞S100A8、S100A9在糖尿病伴牙周炎中的作用及其作用机制。研究结果将对后续以巨噬细胞S100A8、S100A9为靶点的2型糖尿病伴牙周炎免疫防治提供分子理论基础。方法:将94例自愿参与本研究的受试者按照分类标准分为5组:正常对照组20例、轻度慢性牙周炎组20例、中度慢性牙周炎组20例、重度慢性牙周炎组20例、2型糖尿病伴牙周炎组14例。标本置于4%多聚甲醛溶液固定液中固定48 h以上,制作成5μm厚组织连续切片。组织标本经HE染色,光镜下观察各组标本的组织学变化;免疫荧光双染色(double immunofluorescence,DIF)于荧光显微镜及油镜下观察CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ在牙龈组织中的表达情况。结果:1.组织学观察结果1)与正常对照组对比,四组慢性牙周炎组炎症程度得分显著增加(P<0.01);2)慢性牙周炎组中,随着牙周炎病变程度的加重,炎症程度得分显著增加(P<0.01);3)2型糖尿病伴牙周炎组牙龈炎症程度得分与重度慢性牙周炎牙龈炎症程度得分无显著差异(P>0.05)。2.DIF结果1)与正常对照组比较,四组慢性牙周炎患者牙龈组织CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ细胞密度显著升高(P<0.01);2)中度慢性牙周炎组CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ的细胞密度显著高于轻度慢性牙周炎组(P<0.01);3)重度慢性牙周炎组CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ的细胞密度显著高于轻度、中度慢性牙周炎组(P<0.01);4)2型糖尿病伴牙周炎组CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ的细胞密度显著高于轻度、中度、重度慢性牙周炎组(P<0.01)。3.慢性牙周炎的病变程度与CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ相关性分析结果经Pearson相关分析,各组CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ细胞密度与牙周炎的病变程度正相关。结论:通过对94例正常对照组、各组不同病变程度的慢性牙周炎和2型糖尿病伴牙周炎患者牙龈组织进行组织学观察,并进行免疫荧光双染色观察CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ在牙龈组织中的表达情况,得出如下结论:1、在慢性牙周炎,随着牙周炎的病变程度的加重,炎症程度得分显著增加;2型糖尿病伴牙周炎组牙龈炎症程度得分与重度慢性牙周炎牙龈炎症程度无显著差异。2、CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ细胞密度随牙周炎的严重程度加重而显著上升。3、2型糖尿病伴牙周炎组CD68-S100A8双阳性M_φ、CD68-S100A9双阳性M_φ的密度显著高于轻度、中度、重度慢性牙周炎组。