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目的明确负载微小RNA-27b(mi RNA-27b)的间充质干细胞(Bone-marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的细胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)对软骨缺损造成的早期炎症环境下软骨细胞的保护作用和再生情况并探讨其治疗过程中的主要作用机制。方法体外实验:使用10ng/ml的白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞炎症反应模拟体外炎症环境模型,采用超速离心法收集细胞外囊泡并鉴定,取原代软骨细胞,将软骨细胞分为4组(空白组不做处理,炎症对照组加10ng/ml的IL-1β,EVs-mi R-27b组在炎症对照组基础上加入80μg/ml携带mi R-27b的细胞外囊泡(EVs-mi R-27b)和EVs-nor组在炎症对照组基础上加入80μg/ml普通细胞外囊泡(EVs-nor)),通过MTT比色法检测炎症环境下对各组软骨细胞的增殖能力的影响,流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡水平,JC-1线粒体膜电位检测各组软骨细胞内线粒体膜电位变化,此外,我们还通过Western blot实验检测软骨细胞中MMP-13,Casepase-9,cleave Casepase-9,Caspase-3,cleave Caspase-3的表达水平。体内实验:通过手术对膝关节股骨髁间窝钻孔制造软骨缺损建立实验性SD大鼠膝关节软骨缺损模型,造模成功后将大鼠随机分为3组,分别注射20μl的EVs-mi R-27b,EVs-nor,生理盐水,并设立假手术组,6周后取材,观察实验性软骨缺损的局部再生情况;ELISA法检测关节液中IL-1β和TNF-α的含量;免疫组化学染色检测各组膝关节关节软骨中II型胶原的表达。结果透射电镜下显示:视野中很多40-120nm的具有清晰膜结构的茶托样囊泡。Western blot检测到特异性表面标志物CD63,CD81。体外实验结果显示:EVs-mi R-27b组的软骨细胞增殖能力较EVs-nor组增强(P<0.05),较空白组明显旺盛(P<0.05),并且在炎症环境下软骨细胞的凋亡明显减弱(P<0.05),Western blot结果显示EVs-mi R-27b组软骨细胞中Casepase-9和Casepase-3活化水平降低(P<0.05),MMP-13的表达相对含量减少。实验性大鼠膝关节软骨缺损模型中,EVs-mi R-27b组相对于EVs-nor组和假手术组能显著修复软骨缺损。EVs-mi R-27b组关节液中IL-1β和TNF-α的含量略低于空白组,明显低于EVs-nor组(P<0.05)。结论EVs-mi R-27b可以抑制软骨缺损导致的关节腔内炎症环境下软骨细胞的凋亡,促进软骨细胞增殖,并且降低软骨细胞的Casepase-9和Casepase-3的活化,减少MMP-13的表达。在实验性大鼠软骨损伤模型中,关节腔内注射EVs-mi R-27b具有明显抗炎效果和减缓关节软骨退行性变的作用。