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研究目的及意义:随着非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD）的患病率逐年升高,由NAFLD带来的健康问题,严重危害人民的生命健康。现有的治疗手段有限,而中医药在NAFLD防治中的积极作用日益凸显。本研究结合中医传统辨证方法,运用16S rDNA技术分析不同中医证型NAFLD患者肠道菌群结构,以明确不同证型肠道菌群的差异性,观察差异物种与临床指标的相关性,探索中医辨证分型的物质基础,为NAFLD的辨证分型及中西医结合治疗提供客观依据。研究方法:本研究收集江苏省中医院住院部2020年10月-2022年2月诊治的NAFLD患者83例作为研究对象,参照相关指南将患者辨证分为肝郁脾虚组30例、湿浊内停组24例、湿热蕴结组29例,并选取10例作为健康对照组。收集所有入组病例的临床资料及粪便标本,采用16S rDNA技术,进行物种分析,得出不同中医证型的菌群差异,并分析差异菌群与临床指标的相关性。研究结果:1.NAFLD患者的肠道菌群丰富度及群落多样性（Chao1指数、PDwholetree指数）较健康人显著降低（P＜0.05）;不同证型的NAFLD患者的肠道菌群丰富度、群落多样性存在差异,其中湿热蕴结证的菌群丰富度高于肝郁脾虚证及湿浊内停证（P＜0.05）,湿热蕴结证、湿浊内停证的群落多样性高于肝郁脾虚证（P＜0.05）。2.与健康人相比,NAFLD患者在门水平上的变化为放线菌门丰度显著上调,拟杆菌门丰度显著下调（P＜0.003）;除了肝郁脾虚组外,湿浊内停组与湿热蕴结组厚壁菌门丰度均显著上调（P＜0.05）;湿热蕴结组的梭杆菌门丰度显著上调（P＜0.05）。3.不同证型的NAFLD患者两两对比,厚壁菌门丰度由高到低依次为湿浊内停组、湿热蕴结组、肝郁脾虚组,组间比较差异皆有统计学意义（P＜0.03）;肝郁脾虚组的变形菌门丰度显著高于湿浊内停组（P＜0.05）。4.与健康人相比,三组NAFLD患者在属水平上共同的变化为拟杆菌属丰度显著低于健康人（P＜0.05）,布劳特氏菌属、双歧杆菌属显著高于健康人（P＜0.05）。不同证型在属水平上,特有的变化为肝郁脾虚组的ErysipelotrichaceaeUCG-003、Romboutsia丰度显著高于健康对照组（P＜0.02）。湿浊内停组 Eubacteriumhalliigroup、Alistipes、Ruminococcustorquesgroup、ErysipelotrichaceaeUCG-003、Collinsella、罕见小球菌属、Agathobacter较健康对照组菌属丰度显著增加（P＜0.05）;湿热蕴结组的Agathobacter、罕见小球菌属、Parabacteroides、Ruminococcustorquesgroup、Alistipes、梭杆菌属丰度较健康人显著增加（P＜0.05）。5.不同证型的NAFLD患者两两对比,属水平上的差异物种有:肝郁脾虚组的粪杆菌属、罕见小球菌属丰度显著低于湿热蕴结组（P＜0.05）;肝郁脾虚组的Escherichia-Shigella丰度显著高于湿浊内停组（P＜0.008）,罕见小球菌属、Agathobacter、罗斯氏菌属、Fusicatenibacter丰度显著低于湿浊内停阻（P＜0.05）;湿浊内停组的Escherichia-Shigella丰度显著低于湿热蕴结组（P＜0.04）。6.基于LEfSe分析,健康对照组的生物标识为拟杆菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、拟杆菌科、拟杆菌属;乳杆菌科、乳杆菌属、Lactobacillussalivarius、罗斯氏菌属。肝郁脾虚组的生物标识为布劳特氏菌属、EscherichiaShigella、Bifidobacteriumpseudocatenulatum、Bifidobacteriumlongum、Klebsiellaquasivariicola、Escherichiacoli。湿浊内停组的生物标识为厚壁菌门、VeillonellalesSelenomonadales、Clostridiales、梭菌科、Selenomonadaceae、巨单胞菌属。湿热蕴结组的生物标识为放线菌门、双歧杆菌目、双歧杆菌科、双歧杆菌属、Bifidobacteriumadolescentis、梭杆菌门、梭杆菌目、梭杆菌科、梭杆菌、理研菌科、Alistipes属。7.肠道菌群结构与临床指标的关联分析:拟杆菌属与年龄呈正相关,与BMI、GSP呈负相关;链球菌属与年龄、APOA1呈正相关;梭杆菌属与年龄呈负相关,与尿酸呈正相关;巨单胞菌属与年龄呈负相关,与BMI、尿酸、HbA1c、GSP呈正相关;Collinsella与年龄、HDL-C呈负相关,与BMI、尿酸、HbA1c、GSP呈正相关;粪杆菌属与BMI呈正相关,与APOA1呈负相关;乳杆菌属与BMI、HbA1c呈正相关;罕见小球菌属与尿酸、HbA1c呈正相关;多尔氏菌属（Dorea）与 BMI、HbA1c 呈正相关;Ruminococcustorquesgroup与 HbA1c、GSP、LDL-C、APOB 呈正相关;ErysipelotrichaceaeUCG-003 与 GSP、HbA1c呈正相关;Escherichia-Shigella与HDL-C呈正相关;Romboutsia与HDL-C呈负相关,与TG呈正相关;Lachnoclostridium与TG、APOE呈正相关,普雷沃氏菌属（Prevotella）与TG呈负相关,罗斯氏菌属与TG呈负相关;Ruminococcusgnavusgroup与TC、APOE呈正相关;Clostridiumsensustricto 1与年龄呈负相关,与 BMI 呈正相关;Phascolarctobacterium 与 APOB 呈正相关;Alloprevotella 与 BMI、尿酸、HbA1c、GSP 呈正相关;另有Fusicatenibacter、Ruminococcus、双歧杆菌属、布劳特氏菌属、Agathobacter、Eubacteriumcoprostanoligenesgroup、Dialister 与 HbA1c 呈正相关。研究结论:NAFLD患者的肠道菌群结构发生了变化,不同中医证型的NAFLD患者肠道菌群表现不同,不同证型间的差异细菌可能对NAFLD中医证候的形成起了一定作用,肠道菌群的变化为中医证候诊断提供了新的辨证依据;不同证型之间的差异细菌的相对丰度与糖脂代谢相关指标存在关联,这些细菌可能通过影响糖脂代谢而导致NAFLD患者表现为不同的证型,通过观察肠道菌群的变化特点可以评估NAFLD的病情,为NAFLD的中西医结合诊治提供新的思路。