【摘 要】
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该文以Aspergillus nigerN-2为出发菌株,利用Pichia pastoris表达系统构建植酸酶酵母工程菌株,高效表达了有活性的胞外植酸酶PHYA.具体结果如下:该文以Aspergillus niger N-2
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该文以Aspergillus nigerN-2为出发菌株,利用Pichia pastoris表达系统构建植酸酶酵母工程菌株,高效表达了有活性的胞外植酸酶PHYA.具体结果如下:该文以Aspergillus niger N-2基因组DNA为模板,通过PCR扩增出大小约为1.4kb的植酸酶phyA基因片段,扩增产物去除了黑曲霉中植酸酶基因自身的信号肽及内含子序列,包含植酸酶成熟蛋白的编码序列.将PCR扩增产物与克隆载体pMD 18-T连接,筛选出阳性克隆质粒pMD-T/phyA.将pMD-T/phyA质粒经EcoR I和Not I双酶切后,回收phyA基因片段,与同样双酶切的酵母分泌型表达载体pPIC9K连接,成功构建植酸酶重组酵母表达载体pPIC9K/phyA.重组植酸酶PHYA的酶学性质研究表明:PHYA的最适反应pH值为5.0~5.5和2.5,在pH值为2.5~5.5的范围内能保持较高的酶活性,pH 5.5条件下其最适反应温度为45℃,70℃下热处理30min仍可保持60％左右的酶活性,金属离子Ca<2+>、Mg<2+>(浓度为1mmol/L)对表达植酸酶有激活作用,Mg<2+>的激活作用最明显,可使酶活提高13.5％;SDS、EDTA和Na<+>、K<+>、Fe<2+>、Cu<2+>、Sn<2+>、Fe<3+>等金属离子对表达植酸酶均有抑制作用,其中Sn<2+>的抑制作用最强,酶活性仅为对照(不加任何离子)的5.5％,A1<3+>对酶活性影响不大.
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