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第一部分 HMGA2与CDK6在膀胱癌组织标本中的表达关系 目的： 在膀胱癌组织标本中分析HMGA2与CDK6表达之间的相关性。方法： 利用免疫组化方法分析99例膀胱癌组织中HMGA2与CDK6的表达关系。将99例膀胱癌组织标本按照其病理结果分为低级别组和高级别组，依据免疫组化结果，分别分析两组标本HMGA2与CDK6表达强度是否具有相关性。 结果： 在99例膀胱癌组织中，HMGA2与CDK6表达呈中度正相关（r=0.5068，P<0.0001）；在高级别组中，HMGA2与CDK6表达呈中度正相关（r=0.5301，P=0.0022）；在低级别组中，HMGA2与CDK6表达呈低度正相关（r=0.3715，P=0.0018）；在高级别组中，二者表达相关性高于低级别组。 结论： 1.在99例膀胱癌组织中，HMGA2与CDK6表达呈中度正相关。 2.肿瘤恶性程度越高，HMGA2与CDK6在组织中表达相关性越强 第二部分在膀胱癌细胞系中TGF-β1对HMGA2及CDK6表达的影响 目的： 在TGF-β1刺激后，检测膀胱癌细胞HMGA2及CDK6的变化情况，并分析二者表达的关系；构建HMGA2过表达膀胱细胞株为进一步研究HMGA2与CDK6表达水平、细胞增殖以及细胞周期的关系做铺垫。 方法： TGF-β1分别刺激RT4和J82细胞株后，在不同浓度和不同时间分别利用RT-PCR及westernblot的方法检测CDK6、HMGA2 mRNA水平及蛋白水平的表达量。将携带针对HMGA2及CDK6的shRNA的质粒瞬时转染进入J82细胞后，经TGF-β1刺激后测定HMGA2及CDK6的表达量。 利用RT-PCR方法从基因组中将HMGA2 mRNA编码蛋白序列扩增，将扩增的目的片段经T-A克隆载体导入pLVX-Tight-Puro质粒载体，经293T细胞包装后，所得病毒转染RT4细胞，经嘌呤霉素筛选后，得到改造后的稳定细胞株。利用CCK8方法检测HMGA2过表达细胞株与对照组增殖情况，westernblot的方法检测CDK6蛋白水平的表达量。利用PI染色流式细胞仪分析HMGA2过表达后细胞周期的变化情况。 结果： 经TGF-β1刺激后，RT4细胞在6小时时HMGA2及CDK6表达水平同时达到最大，在J82细胞中，经刺激后HMGA2及CDK6表达水平在24小时同时达到最大。同时HMGA2及CDK6的表达水平也随TGF-β1的浓度增加而增大。 在J82细胞中，当HMGA2被瞬时干扰后，CDK6表达也随之下降，细胞周期被阻滞在G1期细胞增多（P<0.05）；HMGA2表达被干扰的细胞经TGF-β1刺激后，CDK6表达无明显上升，G1期细胞百分比无明显减少（P>0.05）。当CDK6被瞬时干扰后，HMGA2的表达不受影响。 RT4细胞过表达后，从第2天开始与对照组相比增殖速度加快（P<0.01），J82细胞HMGA2干扰后，从第2天开始较对照组相比增殖速度减慢（P<0.05），在RT4细胞中，当HMGA2过表达被诱导后，CDK6表达也随之上升，细胞周期G1期细胞百分比减少（P<0.01）；HMGA2过表达细胞系经TGF-β1刺激后，CDK6表达较对照组明显上升，G1期细胞数量明显减少（P<0.05）。 结论： HMGA2通过影响CDK6表达水平上升使得细胞周期G1期细胞百分比发生变化。TGF-β1介导CDK6影响细胞周期通路中有HMGA2参与。