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目的:从mRNA和蛋白水平上,检测KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9表达与HCC侵袭转移的关系及其意义。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测33例HCC、2例静脉癌栓、26例癌旁肝组织、13例远癌肝组织中KiSS-1、KiSS-1R mRNA的表达情况,并分析其与各临床病理参数的关系及其意义;对手工制作组织芯片的方法进行改良,构建含有HCC、肝内转移灶、癌旁肝组织、远癌肝组织以及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化、原位杂交方法及彩色图像分析技术从蛋白质水平上检测了150例HCC、137例癌旁肝组织、98例远癌肝组织、37例肝内转移灶和16例正常肝组织及从mRNA水平上检测了137例HCC、119例癌旁肝组织、85例远癌肝组织、28例肝内转移灶和16例正常肝组织中KiSS-1、MMP-9的表达情况,并分析其与各临床病理参数的关系及其意义。结果:1、RT-PCR结果显示KiSS-1mRNA在HCC中表达明显低于癌旁、远癌肝组织(P<0.01);在HCC组织中,随病理学分级和临床分期的升高,KiSS-1mRNA的表达逐步降低(P<0.05);转移组HCC KiSS-1mRNA表达量显著低于未发生转移的HCC(P<0.05);2例静脉癌栓中均缺失表达。KiSS-1mRNA的表达与HCC年龄、性别、AFP水平、肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型均无明显相关性(P>0.05)。KiSS-1R的表达与HCC年龄、性别、AFP水平、肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型、分化程度、转移与否、病理学分级、临床分期等临床病理参数均无关(P>0.05)。KiSS-1和KiSS-1R mRNA的表达在HCC侵袭转移中存在负相关性( P < 0.05)。2、对手工制作组织芯片的方法进行了改良,成功构建8个35 mm×25 mm×10mm大小的含有HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织以及肝内转移灶和正常肝组织共188个点的芯片蜡块。芯片经H-E、免疫组化、原位杂交染色后切片脱片率分别为1.40%,5.92%,9.76%;有效率分别为99.58%,96.25%和91.19%,芯片组织符合镜下组织学观察和进一步研究的需要。3、原位杂交及免疫组织化学染色结果显示无论是mRNA还是蛋白水平上,KiSS-1在癌旁、远癌肝组织及正常肝组织的表达明显高于HCC组(P<0.01);在HCC组织中,随HCC病理学分级和临床分期的升高,KiSS-1的表达逐步降低(P<0.05);转移组HCC KiSS-1表达量显著低于未发生转移的HCC(P<0.05);KiSS-1在肝内转移灶中的相对表达量显著低于原发灶(P<0.01);此外KiSS-1蛋白的表达与HCC性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型均无明显相关性(P>0.05)。HCC组的MMP-9表达明显高于癌旁、远癌肝组织及正常肝组织组(P<0.01);在HCC组织中,HCC转移组MMP-9表达量显著高于未发生转移的HCC(P<0.01);包膜侵犯组中MMP-9 mRNA的表达明显高于包膜无侵犯组(P<0.05);肝内转移灶表达明显高于相应原发灶的表达(P<0.01);MMP-9的表达与HCC年龄、性别、肿瘤大体类型、组织学类型、分化程度及临床分期均无明显相关性(P>0.05)。在蛋白和mRNA水平上, KiSS-1和MMP-9的表达在HCC侵袭转移中存在负相关性。结论:1、对手工制作组织芯片的方法进行了改良,成功构建8个35 mm×25 mm×10 mm大小的含有HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织以及肝内转移灶和正常肝组织的芯片蜡块。改良的手工制作组织芯片的方法省时省力,节约了实验费用,同时芯片脱片率低,而样本有效率高,芯片组织符合镜下组织学观察和后续进一步研究的需要;2、KiSS-1的缺失表达及MMP-9高表达与HCC的侵袭转移密切相关;3、KiSS-1R的表达与HCC年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、转移与否、临床分期等临床病理参数均无关;4、在HCC组织中, KiSS-1R mRNA的表达随着KiSS-1 mRNA表达降低而升高,KiSS-1和KiSS-1R mRNA的表达存在负相关性,推测由于KiSS-1表达水平的下调反馈性的引起KiSS-1R表达水平的升高,两者表达可能存在反馈性的调控机制;5、在HCC组织中,无论是蛋白还是mRNA水平,KiSS-1和MMP-9的表达存在负相关性,提示KiSS-1、MMP-9在HCC进展的过程中彼此相互作用,共同调控着HCC的侵袭转移的生物学行为;6、KiSS-1的缺失表达及MMP-9高表达是促进HCC侵袭与转移的重要因素,可作为预测HCC转移潜能的有价值的参考指标。