重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)是一种采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来的技术。洛伐他汀(lovastatin,也称莫那可林K,monacolin K)是一种来源于微生物HMG-COA(羟甲基戊二酰辅酶A)还原酶抑制剂,是用于治疗高胆固醇症的药物,它能阻止动脉硬化,减少心肌梗塞等发病的危险,因此在医学上具有重要意义。为了验证重叠PCR技术在洛伐他汀九酮合成酶基因(LOVB)克隆中的应用,本研究设计了4对引物,分别扩增LOVB的4个外显子,并按一定的顺序,利用重叠延伸PCR法将其4个外显子一一串联起来,形成LOVB①-④的cDNA序列,所得的DNA片段经纯化回收后与T克隆载体进行连接,然后转化至大肠杆菌DH5a中,最后用PCR法筛选阳性转化子,并用序列测定的方法鉴定重组质粒。结果表明：重叠延伸PCR成功扩增出了LOVB①-④的cDNA序列,大小1.3kb左右,该序列片段经纯化回收后与T克隆载体进行连接,然后转化至大肠杆菌DH5a中,在含氨苄青霉素(AMP)的LB平板上用PCR法筛选出了阳性菌落,测序结果和NCBI中登录号为AF151722.1的洛伐他汀九酮合成酶基因LOVB①-④的cDNA序列比对,同源性为98.5%,表明通过重叠延伸PCR技术成功克隆了LOVB①-④的cDNA序列,并获得了洛伐他汀九酮合成酶基因LOVB①-④-TA重组质粒,为今后毕赤酵母表达洛伐他汀九酮合成酶基因奠定了坚实的基础。