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DNA疫苗是一种很有潜力的乳腺癌辅助生物治疗手段。与其他给药方式相比口服给药具有安全性好、病人服从性高等优点。近年来，DNA疫苗的口服载体已成为一个研究热点。本研究构建了以海藻酸修饰的壳聚糖纳米颗粒(A.C.NPs)的载体，并采用这一载体携带Legumain DNA制成口服疫苗，并在小鼠乳腺癌模型中验证了该疫苗对抗肿瘤的作用。
首先，我们检测了在人工胃液条件(pH1.5)下，A.C.NPs载体对所携带DNA的保护作用。DNA琼脂糖凝胶电泳分析的结果表明，与未经海藻酸修饰的壳聚糖纳米颗粒(C.NPs)相比，A.C.NPs能够有效减少DNA在人工胃液条件下的降解。粒径分布结果显示A.C.NPs在pH＜3.0的条件下开始聚集形成毫米级的聚合物;当pH＞3.0时这一聚合物又会解聚重新分散成为纳米级的颗粒。
其次，我们检测了经口服后，A.C.NPs载体携带的DNA在体内小肠派氏淋巴结表达的情况。用携带有EGFP质粒的A.C.NPs对小鼠进行灌胃，免疫荧光染色及流氏细胞仪分析结果均显示，灌胃三天后小鼠小肠派氏淋巴结显示出明显的EGFP表达。
最后，我们建立了小鼠4T1原位乳腺癌模型，并将荷瘤小鼠分为以下五组分别进行灌胃:①PBS（空白对照组）;②装载空质粒的A.C.NPs（阴性对照组）;③装载全长Legumain质粒的C.NPs（对照组）;④装载全长Legumain质粒的减毒的沙门氏菌载体（阳性对照组）;⑤装载全长Legumain质粒的A.C.NPs（实验组）。结果显示第21天处死小鼠时阳性对照组及实验组小鼠肿瘤体积明显小于其他对照组。我们从荷瘤小鼠体内分离脾脏获得脾细胞与预先使用氯化钴刺激过的4T1细胞进行共培养。流式细胞分析结果表明，装载有Legumain DNA的A.C.NPs处理组其小鼠脾脏活化的细胞毒性T细胞(CD3+/CD8+/CD25+)与PBS对照组相比增加了4.7倍，与C.NPs载体处理组相比增加了2.3倍。
综上所述，A.C.NPs载体能够有效减少所携带的DNA经口服后在胃液中的降解;在小鼠乳腺癌模型中，采用A.C.NPs载体携带Legumain DNA制备的口服疫苗能够增加DNA疫苗的抗肿瘤效果。