野生稻抗性候选基因的筛选和克隆

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nadiazhao
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究采用了茶陵野生稻、东乡野生稻、小粒野生稻等3个野生稻品种与部分可转化大片段药用野生稻基因组文库等材料进行了野生稻抗性候选基因的转化与克隆研究。研究主要结果如下: 1.东乡野生稻、小粒野生稻、茶陵野生稻等3个不同野生稻品种的总DNA电泳结果表明,采用CTAB法提取野生稻总DNA可行,并且提取的DNA质量能够满足野生稻基因转化与克隆及其他分子生物学分析要求;3个不同野生稻品种的总DNA分子量相差不大,DNA片段长度均在23KB左右; 2.选用9对引物分别对东乡野生稻、小粒野生稻与茶陵野生稻等3个不同野生稻的总DNA进行了引物扩增筛选,结果表明第6对(代号为WR-1、WF-1)和第10对(代号为S2、AS3)引物的扩增效果最好,主要表现为带型最清楚,非特异性扩增也最少。因此,用第6对引物对茶陵野生稻总DNA进行扩增、回收、克隆及测序分析,初步得到4类不同的抗性候选基因材料;用第10对引物对东乡野生稻总DNA进行扩增、回收、克隆,得到34个阳性重组子; 3.在用WF-1、WR-1引物对茶陵野生稻总DNA进行PCR扩增的过程中,发现简并引物的用量应该比普通特异性引物要高很多倍才能达到扩增的效果,通过1μL(12.5μmol)、2μL(25μmol)、4μL(50μmol)、8μL(100μmol)、16μL(200μmol)等5种不同简并引物浓度的实验,结果表明16μL(200μmol)的引物浓度的扩增效果最好,其电泳带型最清楚,非特异性的扩增也最少,结果符合简并引物合成原则即简并性要好且简并性不能太高; 4.通过WF-1、WR-1引物对药用野生稻的可转化大片段基因组BIBAC2文库编号为117的384孔板进行抗性候选基因的筛选,筛选出117M18,117M19,117M22,117N2,117N5等五个克隆,选出117M18与117N5进行回收、连接及测序分析,发现这两个克隆序列的同源性高达99.8%,并且与从茶陵野生稻里得到的4类抗性候选基因中的CL17那一类的同源性也高达99.6%。通过在NCBI网站里Blast搜索得知:它与粳稻第三号染色体上的DP000009.1(GI:73746173)存在高度的同源性; 5.同时通过实验我们还得知许多根据抗性基因保守序列设计的引物都能扩增得出构建基因文库所用的BIBAC2空载体; 6.对药用野生稻可转化大片段基因组文库进行质粒转化到农杆菌LBA4404,得到164个携带药用野生稻基因组片段的农杆菌LBA4404菌种,从中挑选了117K6,117K8,117K9,117K10,117K11与117K12等6个菌种,进行了稳定性鉴定,结果表明药用野生稻基因组片段在农杆菌LBA4404中能够稳定遗传。
其他文献
有经验的作者描写人物,都注意动词的选用。因为动词可以使人物活起来。有的西方记者写报道,主张一句话中至少应有一个动词。但是,使用动词必须恰到好处,才能起到良好的作用
小麦杂种优势利用中,采用CMS途径来进行强优势组合的选配,恢复系的选育至关重要,一直受到杂交小麦育种家们的普遍重视,其中致力于寻找新的恢复源是选育恢复系的重中之重。研究育性基因的区域分布及育性恢复性的规律对寻找、培育、利用新恢复系,扩大恢复系的遗传多样性具有重要意义,可为小麦CMS的研究及利用取得实质性突破提供理论依据和坚实的材料基础。为此,本研究选用具有四种胞质、两种核型的同核异质、同质异核粘类
A new predictive control algorithm for Electromagnetic disturbance turntable measurement system is presented In this paper.This control algorithm has the advant
为选育高产、优质苎麻新品种,进一步提高新植苎麻的原麻产量、改善其纤维品质,本文以湖南主要苎麻品种湘苎三号、Tris-1、Tris-2、中苎一号作为对照,对新品系R057新麻的根茎叶生
Background: The Chinese Consortium of Universities for Global Health (CCUGH) was established within schools of public health in 2013 with the goal of enhancing
Background: Diabetes mellitus (DM) has become a serious chronic disease.Self-management strategies help persons with DM make choices which will develop skills n
美国政府不直接控制电视节目,它是由两种势力非正式地控制的。一是民意,一是广告。那么,美国电视广告又受谁制约呢?联邦通讯委员会和联邦贸易委员会这两个机构以挑剔的眼光
为改进罗汉果组织培养技术,以青皮果品种为材料,对采自不同地方外植体的灭菌效果、不同光照条件对外植体直接分化再生苗能力的影响、不同外植体直接分化再生苗能力的差异,以及不
以转TrxS基因啤酒大麦晋引六号(JY6)纯合株系籽粒和未转基因对照为材料,研究了TrxS基因的表达及其对啤酒大麦发芽种子水解酶和贮藏物质降解的影响。主要结论如下: 1、TrxS基
为了明确冀西北地区早熟双穗玉米及青贮玉米高产技术,本文通过以下几个试验研究了地膜覆盖、农艺措施、植物生长调节剂对早熟双穗玉米的影响及种植方式、密度对青贮玉米产量和