沙门氏菌Ⅰ类整合子中耐药基因水平转移研究

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为了解贵州省规模养殖场猪源沙门氏菌I类整合子的流行情况、整合子中耐药基因盒的种类以及I类整合子携带耐药基因与细菌耐药表型的相关性,建立体外和小鼠肠道中I类整合子携带耐药基因盒水平传播模型,探讨异源异种细菌间耐药性水平转移的可能性,评估动物细菌耐药性向人源细菌传播的风险频率。  本研究从贵州省六盘水市和毕节地区7个县(市)的39个的规模化养殖场中猪肛门拭子及猪场总排污池棉拭子398份样品,按照国家标准(GB/T4789.4—2010)分离得到沙门氏菌57株,采用微量肉汤稀释法,参照参照CLSI(2009版)标准,测定57株沙门氏菌对12种抗菌药物敏感性。结果表明:57株沙门氏菌对土霉素、氨苄西林、阿莫西林、大观霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、庆大霉素、磺胺异恶唑、氟苯尼考、头孢噻呋、复方新诺明和多粘菌素E的耐药率分别为100%、89.5%、89.5%、89.5%、84.2%、68.4%、57.9%、57.9%、52.6%、47.4%、26.3%、22.8%;分离鉴定沙门氏菌多重耐药率达100%,最少对2种药物耐药,最多对12种受试药物全部耐药。该地区的规模养猪场耐药形式严峻。  应用PCR方法检测57株沙门氏菌中I类整合子的携带率以及I类整合子中可变区携带的耐药基因盒类型,采用Х2检验分析I类整合子携带与细菌耐药表型的相关性。结果表明:57株沙门氏菌中检测出23株携带有I类整合子,检出率为40.4%(23/57),其中18株含有耐药基因盒,携带率为31.6%(18/57);18株沙门氏菌I类整合子基因盒阳性株共含有7种不同的耐药基因,即氨基糖苷类:aadA2、aadA5、aadA22、aadA23b、磺胺类:dfrA1、dfrA12、dfrA17;经X2检验得出整合子阳性菌株对抗菌药物的耐药率极显著或显著高于整合子阴性菌株,说明耐药基因与I类整合子、耐药表型与细菌多重耐药之间存在着一定的联系。  在无抗菌药物压力条件下,对携带I类整合子耐药基因盒的猪源沙门氏菌与人源大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌进行体内、外接合试验,研究动物源细菌耐药性向人源细菌转移风险频率。结果表明:猪源沙门氏菌与人源大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌的体外接合频率在10-3~10-5之间,与人源金黄色葡萄球菌的体外接合频率在10-7~10-8之间,猪源沙门氏菌整合子携带耐药基因盒向人源革兰氏阴性菌体外转移频率在1.6×10-3~8.3×10-6cfu/mL(供体菌),在人源革兰氏阳性菌中并未检测到猪源整合子及耐药基因盒;猪源沙门氏菌整合子携带耐药基因盒与人源大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌体内水平转移频率在3.4×10-3~5.3×10-5cfu/mL(供体菌);耐药基因盒在小鼠肠道中转移频率略高于体外试验。研究结果表明:猪源沙门氏菌可将其I类整合子携带的耐药基因盒传递给人源革兰氏阴性菌,且体内耐药基因水平转移频率高于体外。
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