论文部分内容阅读
目的:本研究利用荧光差异双向电泳(2D-DIGE)联合基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)蛋白质组学技术筛选出自发性系统性红斑狼疮NZB/W F1小鼠尿蛋白≤+组与尿蛋白≥3+组肾小球组织的差异蛋白表达谱,从蛋白质组学角度为狼疮性肾炎的疾病活动期诊断以及病情监控提供新的线索。方法:首先,以自发性系统性红斑狼疮NZB/W F1小鼠肾小球标本作为研究对象,28周龄C57BL/6作为对照组,采用磁珠灌注肾脏的方法获得小鼠肾小球组织,分为1)蛋白尿蛋白≤+组、2)尿蛋白≥3+组、3)28w C57BL/6组。随后,在各组标本的Cy Dye荧光染料标记后进行荧光差异双向电泳,对软件筛选出的蛋白差异倍数≥1.4的蛋白点进行基质辅助激光解吸-飞行时间质谱,得到NZB/W F1小鼠尿蛋白≤+组与尿蛋白≥3+组差异蛋白的表达谱。最后对RRAGB、SMG1、MMSA、ANGP2、ATPB等蛋白进行western blot及免疫组织化学验证。结果:对133个蛋白点进行质谱鉴定后共得到56个差异表达蛋白,其中NZB/W F1小鼠尿蛋白≤+组与尿蛋白≥3+组比较表达上调的差异蛋白18个,表达下调的差异蛋白23个;NZB/W F1小鼠尿蛋白≥3+组与28w C57BL/6组比较表达上调差异蛋白1个,表达下调差异蛋白11个;NZB/W F1小鼠尿蛋白≥+组与28w C57BL/6组比较表达下调差异蛋白3个。NZB/W F1小鼠蛋白尿蛋白≤+组与尿蛋白≥3+组比较,经western blot检测得出SMG1、MMSA、ATPB表达下调,RRAGB、ANGP2表达上调;经免疫组织化学检测得出SMG1、MMSA、ATPB表达下调,ANGP2表达上调。结论:通过对NZB/W F1小鼠肾小球蛋白的蛋白质组学研究,筛选出56个差异表达蛋白。依据两组间蛋白差异倍数、质谱鉴定的蛋白匹配度及对其功能和LN相关性的分析后进行western blot及免疫组织化学加以验证,RRAGB、SMG1、MMSA、ANGP2、ATPB可能是LN疾病加重的靶蛋白。