红景天提取物抗衰老活性及作用机理研究

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红景天为多年生景天科草本植物,属于天然珍贵药材。红景天中富含多酚类成分,对各种疾病具有治疗价值,如抑郁症、阿尔茨海默病、帕金森病、肝炎、癌症、糖尿病和心脑血管疾病等。但以往的研究主要集中于红景天抗氧化、抗疲劳及抗高原病等活性,对红景天提取物的抗衰老活性鲜见报道。因此,本课题主要研究红景天提取物多酚物质组成和含量、化学和细胞的抗氧化活性、抗肝癌细胞HepG2增殖活性和促HepG2细胞凋亡机制。并选用秀丽隐杆线虫模型,研究红景天游离态提取物的抗衰老活性和作用机制。主要有以下研究结果:(1)通过HPLC法鉴定红景天游离态植物化学物组成,共鉴定出6种酚类物质,包括3种酚酸(没食子酸、绿原酸和咖啡酸)和3种黄酮(表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG和儿茶素),其中EGCG含量最高。采用化学抗氧化(PSC、ORAC)和细胞抗氧化(CAA)方法全面评价红景天提取物的抗氧化活性,发现红景天提取物抗氧化活性高,且高于常规的水果等。(2)以人肝癌细胞(HepG2)为模型,研究红景天游离态提取物的抗癌细胞增殖活性。结果显示,样品组HepG2细胞的凋亡率呈现剂量效应,主要是通过内源性线粒体路径发挥促凋亡作用。(3)在秀丽隐杆线虫抗衰老试验中,首先研究红景天游离态提取物对于线虫寿命和常规生理指标(脂褐素、行动力、繁殖力、体长)的影响,然后探究红景天提取物对于线虫抗应激(热应激,紫外应激和百草枯氧化应激)能力和抗氧化酶的影响,红景天提取物有效提高了线虫的各项健康生命指标,同时,也对体长没有明显影响。线虫抗氧化应激相关试验结果显示,红景天游离态提取物显著减少了线虫体内的ROS和MDA的产生,并上调了线虫抗氧化酶(SOD和CAT)的活性,这表明红景天提取物的抗氧化活性可能对其抗衰老作用有所贡献。(4)试验从分子水平上研究红景天游离态提取物对线虫体内抗衰老相关基因表达的影响,并辅助使用线虫突变株和核定位试验来验证关键基因的作用。关于其潜在的抗衰老分子机制,研究发现,红景天提取物上调线虫中sod-3、gst-4、daf-16及skn-1的基因表达,下调daf-2和age-1的基因表达,并促进DAF-16和SKN-1的蛋白迁移进入细胞核内。此外,红景天提取物消除了daf-16(mu86)和skn-1(zu169)突变体的寿命延长。这些结果表明,红景天提取物可以通过胰岛素/IGF信号传导和SKN-1途径延长秀丽隐杆线虫的寿命,健康周期和增强抗逆性。
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