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MHCⅠ类相关基因A(major histocompatibility complex classⅠchain-related gene A，MICA)位于MHCⅠ类基因区域，HLA-B位点上游约46kb处。MICA基因具有高度的多态性，其等位基因在不同人群中分布不同，并且被认为与强直性脊柱炎、乳糜泻等多种疾病关联。正常情况下MICA蛋白仅微量表达于肠道上皮，但当细胞受到感染、应激或恶性转化时可明显上调其表达量。MICA与表达于CD8~+T细胞、γδT细胞、NK细胞表面的C型凝集素样受体NKg2D结合，激活这些淋巴细胞而发挥其免疫功能。近年来，MICA在病毒感染及肿瘤发病中的作用一直是人们较为关注的问题。大量研究证实，MICA与NKg2D配受体间活化信号的传导在肿瘤的免疫监视中具有重要作用，但是MICA依然能够在许多进展期肿瘤，如乳腺癌、肺癌、胃癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌及黑色素瘤细胞表面表达，提示MICA或NKg2D处于非正常状态，使肿瘤逃逸了机体的免疫监视。目的：本课题以肿瘤相关性抗原MICA及其受体NKg2D为研究对象，分三部分研究MICA及其受体NKg2D在结肠癌发病和病程转归中的作用。首先分析MICA基因多态性、膜表面MICA分子的表达和血清中可溶性MICA(sMICA)蛋白的浓度与结肠癌的发病及转归的关联；其次从受体的角度出发，探讨不同淋巴细胞亚群表面NKg2D的表达与结肠癌发病及病程转归的关联；最后体外克隆可溶性MICA基因，利用原核表达载体大量表达、纯化sMICA蛋白，并将sMICA包被于96孔板形成固定型MICA(iMICA)，分别探讨可溶性及固定型MICA对NKg2D阳性淋巴细胞活化、增殖、凋亡、IFN-γ分泌及细胞毒功能的影响。实验结果：1．以PCR／SSP技术分别对扬州地区正常人群和结肠癌患者的MICA基因进行分型，结果显示MICA等位基因在结肠癌病人和正常群体中的分布无明显差异(P＞0.05)；以免疫组化的方法检测结肠癌肿瘤细胞MICA的表达，发现未发生引流淋巴结转移的结肠癌组织MICA表达量明显高于已发生淋巴结转移的肿瘤组织(P＜0.01)；sMICA的ELISA检测结果显示结肠癌患者血清中sMICA的浓度比正常群体显著升高(P＜0.01)；Dukes C～D期患者血清中sMICA的含量又比Dukes A～B期患者血清中的含量显著增加(P＜0.01)。2．采用流式细胞仪双色标记法检测发现，与正常个体相比，结肠癌患者外周血NKg2D阳性NK细胞明显减少(P＜0.05)。对于同一位肿瘤患者，发生肿瘤转移的淋巴结内淋巴细胞NKg2D的表达率与其外周血中相比迅速降低(P＜0.01)，而且转移淋巴结内NKg2D~+γδT细胞也明显减少(P＜0.05)。3．利用原核表达体系大量制备可溶性MICA蛋白，对NKg2D阳性淋巴细胞进行一系列功能实验。结果显示可溶性MICA在3天、5天均抑制NK细胞的增殖(P＜0.01)，但对NK细胞凋亡无影响(P＞0.05)，作用24h可降低淋巴细胞表面活化性受体NKg2D及早期活化标志性受体CD69的表达(P＜0.05)，受可溶性MICA作用，NK细胞IFN-γ的分泌明显降低(P＜0.05)，而在24h对NK细胞毒功能无显著影响(P＞0.05)。另外，将可溶性MICA蛋白包被于96孔板经4℃过夜形成固定型MICA，与NK细胞作用3天、5天后，对NK细胞的增殖及IFN-γ,的分泌均有显著的促进作用(P＜0.01)，作用24h固定型MICA可促进CD69的表达(P＜0.01)，经固定型MICA作用后，NK细胞毒活性也显著增强(P＜0.01)。结论：1．MICA基因多态性与结肠癌的发病无关联；MICA高表达的结肠癌患者预后较好；可溶性MICA通过降低淋巴细胞活性而抑制免疫功能，提示动态检测sMICA在结肠癌患者血清中的含量可作为评估疾病预后的参考指标。2．下调淋巴细胞NKg2D的表达是结肠癌肿瘤细胞逃逸免疫监视的机制之一。3．可溶性MICA蛋白可抑制NK细胞的增殖，下调NKg2D、CD69受体的表达，抑制IFN-γ的分泌；而固定型MICA可活化NKg2D阳性淋巴细胞，促进NK细胞的增殖，上调CD69的表达，促进IFN-γ的分泌，并增强NK细胞细胞毒功能。