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当细胞暴露于各种环境应激条件下,如亚砷酸盐,缺氧和热休克时,细胞终止蛋白翻译,在细胞质中形成储存mRNA的颗粒,称为应激颗粒(stress granule,SG)。SG是在应激条件下从解聚的多核糖体储存位点释放的mRNA,对选择性翻译是所必需的。当应激条件消失时,应激刺激的细胞内损伤得到修复,例如DNA损伤和错误折叠蛋白的积累。RNA结合蛋白T细胞内部抗原-1 (TIA-1)和GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1 (G3BP1)是参与SG形成的重要组件。作为对环境应激的一种保守应答反应,SG存在于各种物种中。然而,在鸡细胞中SG形成以及TIA-1/G3BP1在鸡SG装配中的作用还没有被阐明。本研究重点将对鸡TIA-1/G3BP1的功能及其在病毒复制中的作用进行研究。TIA-1在调节人类细胞中前mRNA剪接,mRNA翻译和SG形成中发挥作用。在本研究中,我们克隆鸡TIA-1 (cTIA-1),结果表明外源转染cTIA-1促进人和鸡细胞中经典SGs的形成。具有氨基末端GFP标签(ntGFP-cPRD)或Flag标签(Flag-cPRD)的cTIA-1朊蛋白相关结构域cPRD的过表达诱导典型的SG的产生,说明cPRD参与了SG的聚集。然而,羧基末端GFP标签(ctGFP-cPRD) cPRD诱导明显较大的细胞质颗粒,并且不与内源性G3BP1共定位,CHX处理后仍保持稳定不降解,这些结果表明这些颗粒不是典型的SGs,ctGFP标签影响cPRD定位。在外界环境应激下,内源性cTIA-1被募集到的鸡细胞的SG中,在热休克处理下,鸡心脏中出现明显SG颗粒。以上结果表明:cTIA-1在鸡细胞中的经典SG形成中起作用,cPRD在SG聚集过程中发挥重要作用。G3BP1是SGs的重要组件,能够启动组装SGs形成多聚体。为掌握G3BP1在如何作用于鸡细胞中SG形成,以及鸡G3BP1 (cG3BP1)在新城疫病毒(NDV)感染诱导SG形成过程中的作用,用NDV感染HeLa细胞,免疫荧光检测内源性G3BP1的定位,结果表明G3BP1呈现典型的点状荧光,但不与病毒P蛋白共定位。将鸡G3BP1分别转染至HeLa, DF-1和CEF后,以不同应激处理之后均能在细胞中观察到SG。外源转染cG3BP1和各分段结构域后以不同应激处理之后观察与内源性SG标志物共定位现象,结果发现G3BP1的A结构域(NTF2样结构域)不能被招募到SGs中,并且抑制原有SGs的形成,D区为RNA结合结构域,单独表达D区能够诱导SG形成,说明cG3BP1的RNA结合结构域对聚集至关重要。最后转染G3BP1之后感染NDV,以Western-blot和TCID50检测病毒复制情况。结果显示:G3BP1过表达能够增强病毒细胞中病毒蛋白的表达以及上清中的病毒滴度,说明SG在NDV复制过程中发挥促进作用。鸡TIA-1和G3BP1在鸡细胞SG形成过程中至关重要,鸡细胞中G3BP1介导的SG能够促进NDV复制,这为进一步研究NDV和禽源细胞互作奠定了基础。