高纯镁对大鼠股骨牵张成骨影响研究

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目的:为了促进牵张成骨过程中成骨及硬化过程,将高纯镁棒应用于大鼠股骨牵张成骨模型。通过影像学、组织学、生物力学研究高纯镁对牵张成骨的影响。利用PCR-array探索潜在机制并利用Western Blot及组织学验证。从而为临床中牵张成骨治疗提供经济有效的辅助治疗方法。方法:制作大鼠股骨牵张成骨模型。制备直径为1mm,长度5mm高纯镁棒。大鼠股骨牵张成骨模型随机分为三组:(1)高纯镁组;(2)不锈钢组;(3)空白组。牵张计划:(1)潜伏期1周;(2)牵张2周(牵张速0.25mm/12h、牵张长度7mm);(3)硬化6周。术后第3、6、9周取材行micro-CT检查、组织学及免疫组化检测。对第9周出四组组术后3、5、7、9周麻醉后行连续X线检测。对术后第9周组织进行生物力学检测。术后对矿化中期(第6周)组织进行PCR-array检测探索潜在机制并利用Western Blot检测和免疫组化验证。结果:(1)成功制作大鼠股骨牵张模型。(2)成功制备直径为1mm,长度5mm高纯镁棒。(3)影像学检测结果显示在牵张期结束后三组无明显差别,但随着硬化进行,高纯镁组展现出更快的矿化速度。(4)组织学检测结果显示三组在牵张结束后牵张段还有大量软骨样组织,并无明显差别。在硬化过程中高纯镁组展现出更快的硬化速度并在第九周基本完成硬化过程。不锈钢组合空白组在第九周牵张段还存在未硬化完成软骨组织。(5)生物力学检测显示在第9周高纯镁组极限载荷和断裂能均优于其他两组。(6)免疫组化结果发现高纯镁组CD31阳性血管在整个硬化期都高于两个对照组。OCN阳性细胞在术后第6周高于两个对照组,第3周和第9周无明显差异。(7)成血管相关PCR-array结果显示高纯镁组VHL/HIF-1α/VEGF通路表达增高。(8)Western Blot验证结果显示VEGF和HIF-1α的蛋白表达在三个时间点都较对照组高。VHL的蛋白表达从3周到9周逐渐降低。(9)免疫组化结果验证显示VEGF和HIF-1α抗体的定性免疫染色细胞显着增加,而VHL抗体显示出显着减少。结论:(1)高纯镁棒具有促进股骨牵张成骨过程中促进新生骨硬化作用。(2)高纯镁棒在牵张成骨中具有成血管作用。(3)高纯镁通过VHL/HIF-1α/VEGF通路促进大鼠股骨成血管化进一步促进牵张成骨。总结来说,高纯镁应用于临床可以缩短骨缺损患者牵张成骨术后携带外固定架的时间,进一步减少并发症,使牵张成骨得到更广泛的应用,具有一定的实用价值。
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