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背景:内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)是成熟内皮细胞的前体细胞,可迁移到缺血组织,分化为成熟内皮细胞(Enthothelial cells,ECs),发挥血管新生作用。随着EPCs研究的深入,其在临床诊断、预后判断和各种缺血性疾病的治疗方面将会有广阔的应用前景。EPCs不仅存在于骨髓、外周血和脐血中,还存在于胚胎、心脏、骨骼肌和血管中。然而,这些来源的EPCs都存在一定的限制。因此,寻找合适来源的EPCs就变得尤为重要。近年来的研究发现,脂肪组织中含有多种细胞,包括EPCs。脂肪组织不仅具有来源丰富,获取容易且其对人体创伤较小的优势,而且其种子细胞丰富,适合细胞的自体移植,因此,脂肪组织是理想的EPCs种子细胞来源,但目前国内外缺乏有效的分离培养脂肪源性EPCs的方法。目的:探讨一种有效、经济、可行的从人脂肪组织中分离培养EPCs的方法,并对其生物学特性展开研究。方法:来用酶消化法从人脂肪组织中分离培养出脂肪基质血管细胞(Stromal vascular cells,SVF),流式细胞术检测SVF的免疫表型以分析其细胞成分。通过EPCs和脂肪干细胞(Adipose stem cells,ASCs)对胰蛋白酶的敏感性不同,差速消化分离EPCs和ASCs。观察细胞的形态特征,绘制细胞的生长曲线、计算细胞的细胞倍增数(PD)和倍增时间(DT)评估细胞的生长增殖能力,流式细胞分析术检测EPCs的表型特征,免疫荧光染色观察细胞摄取FITC-UEA-1和吞噬Dil-ac-LDL的能力。最后,通过体外成血管试验分析EPCs的血管形成能力。结果:通过差速消化分离法,我们成功从脂肪组织中分离出EPCs和ASCs。流式细胞术检测分析显示EPCs表达CD31、CD34和VEGFR2,而几乎不表达造血干细胞表面标志CD45;体外扩增培养后呈典型的铺路石样形态,并可吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)和结合荆豆凝集素(FITC-UEA-1),在荧光显微镜下观察吞噬Dil-ac-LDL的EPCs呈红色荧光,而结合FITC-UEA-1呈绿色荧光。此外,将其接种于Matrigel人工基底膜,可形成血管腔样的结构。ASCs高度表达CD29、CD73、CD90、CD105等间充质细胞表面标志,体外扩增培养呈长梭形纤维细胞样生长。结论:我们通过差速消化分离法成功从人脂肪组织中分离培养出EPCs,为脂肪源性EPCs的分离培养提供了一种有效、经济、可行的研究方法,为各种缺血性疾病提供了丰富的种子细胞来源,给治疗性血管新生和再生医学提供了广阔的应用前景。