论文部分内容阅读
本论文通过体内和体外实验分别探讨白藜芦醇对高能低蛋白日粮致FLHS蛋鸡肝Insulin/AKT/S6K1信号通路的调控和保护机理。1)动物实验:选用288羽高产海兰褐蛋鸡随机分成四组,Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮(代谢能2678.99 kcal/kg,粗蛋白15.86%);Ⅱ组为病理模型组,饲喂高能低蛋白日粮(代谢能3100.00 kcal/kg,粗蛋白12.00%);Ⅲ组:饲喂添加400 mg/kg白藜芦醇的对照组日粮(Ⅰ组+400 mg/kg白藜芦醇);Ⅳ组:饲喂添加400 mg/kg白藜芦醇的高能低蛋白日粮(Ⅱ组+400 mg/kg白藜芦醇)。每组6个重复,每个重复12羽。实验期为120d,并于正式实验第40 d、60 d、80 d、100 d、120 d分别随机采样进行相关实验。实验结果如下:(1)病理组(Ⅱ组)与对照组(Ⅰ组)蛋鸡比较,血清TG、T-Ch含量显著升高(P<0.05),HDL-Ch含量在实验期内呈升高后降低(P<0.05);腹脂率、肝指数和肝脂率显著升高(P<0.05);ALT、AST显著升高(P<0.05)。病理组织观察肝脏呈弥漫性脂肪病变,脂滴大量蓄积于细胞胞浆,细胞核位于细胞边缘,肝小叶可见炎症细胞浸润。日粮中添加400 mg/kg白藜芦醇(Ⅲ组、Ⅳ组)可显著降低蛋鸡肝脏血清TG和T-Ch含量,ALT、AST活性及降低肝脏脂肪沉积。(2)实验Ⅱ组与Ⅰ组蛋鸡比较,血糖、胰岛素、HOMA-IR指数、IL-6和TNF-α含量显著升高(P<0.05);口服葡萄糖耐受试验(OGTT)和胰岛素敏感试验(IST)蛋鸡血糖变化曲线下面积(AUC)比较显著升高(P<0.05)。日粮中添加400 mg/kg白藜芦醇(Ⅲ组、Ⅳ组)显著降低蛋鸡血糖、胰岛素、IL-6和TNF-α含量,OGTT和IST血糖AUC显著下降(P<0.05);(3)实验Ⅱ组与Ⅰ组蛋鸡比较,肝脏IRS-1酪氨酸、AKT磷酸化水平降低,S6K1蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05);InsR、4EBP-1、Glut-1、Glut-3基因mRNA表达显著降低(P<0.05);TOR、S6K1、FOXO1基因mRNA表达显著升高(P<0.05)。日粮中添加400 mg/kg白藜芦醇(Ⅲ组、Ⅳ组)能够显著改善蛋鸡肝脏Insuln/AKT/S6K1信号通路蛋白激活和下游效应因子基因mRNA表达(P<0.05)。(4)实验Ⅱ组与Ⅰ组蛋鸡肝脏代谢组检测发现46种差异代谢物质,其中Ⅱ组与Ⅰ组比较发现延胡索酸、亚油酸、苯丙酮酸、丙氨酸和谷氨酸等14种代谢物质上调,左旋葡聚糖、山梨醇、来苏糖,苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸和抗坏血酸等32种代谢物质下降(P<0.05);结果显示高能低蛋白日粮可致FLHS蛋鸡肝脏三羧酸循环和氨基酸代谢失衡;超微结构观察发现肝细胞线粒体嵴结构模糊、肿胀、断裂,内质网肿胀崩解,胞浆内自噬小体增多,提示FLHS蛋鸡线粒体功能发生障碍从而导致细胞损伤。2)体外实验:实验通过原位胶原酶灌注法提取鸡肝细胞,分别探讨白藜芦醇对高糖、高脂肪酸致蛋鸡肝细胞氧化应激和肝脂变模型的保护作用。结果如下:(1)30 mM葡萄糖处理鸡原代肝细胞能显著降低细胞内T-SOD、CAT、GSH-Px酶活力,导致MDA含量显著上升(P<0.05);Nrf-2基因mRNA表达显著下降,NF-kB、IL-1β和TNF-α基因mRNA表达显著上升(P<0.05)。白藜芦醇能够显著上调Nrf-2,抑制NF-kB、IL-1β和TNF-α基因mRNA表达(P<0.05),从而改善肝细胞抗氧化水平;(2)1 mM棕榈酸处理肝细胞能显著降低肝细胞内T-SOD酶活力,MDA、TG含量上升(P<0.05)。白藜芦醇能够显著改善肝细胞内抗氧化状态,上调肝细胞内InsR、PPAR-α基因mRNA表达,抑制TOR、S6K1、Srebp-1c基因mRNA表达(P<0.05)。综上所述:白藜芦醇能够显著改善高能低蛋白日粮致FLHS蛋鸡脂质代谢紊乱、胰岛素及其信号通路传导障碍从而降低FLHS肝脏损伤与脂质沉积水平。