庚型肝炎病毒（GB Virus C/Hepatitis G Virus,GBV-C/HGV）是 1995～1996年间发现的一种单股正链RNA病毒,基因组全长约9.4 kb,属于黄病毒科的Pegivirus属。GBV-C与HIV的传播途径十分相似,GBV-C/HIV共感染率高达26.3%～33%。经多年临床研究发现,GBV-C虽然无致病性,但与HIV共感染可以延缓HIV患者的疾病进程,主要表现为降低HIV患者的病毒的载量、提高HIV患者的CD4+细胞数、延长HIV患者寿命。鉴于GBV-C本身无致病性,但与HIV共感染有益于延缓HIV患者病程的特点,阐明GBV-C抑制HIV的作用机理将是GBV-C应用于HIV疾病治疗中亟待解决的关键科学问题。然而确定病毒与共用宿主间直接作用的蛋白及其功能是研究两病毒间相互作用机理的关键环节。目前GBV-C抑制HIV-1增殖的作用机理研究主要集中在GBV-C阻碍了 HIV-1入胞过程和改变了 T细胞活性两大方面,尽管已有文献报道GBV-C的包膜糖蛋白E2和NS5A短肽可以抑制HIV-1复制,但究竟GBV-C与其共用宿主上的哪些靶蛋白直接相互作用,从而阻碍了HIV-1入胞、影响了T细胞活性等效应的产生,这些靶蛋白的功能又如何,目前仍不明确。鉴于此,本课题利用第四代Gold酵母双杂交系统对GBV-C与人类T细胞互作蛋白进行筛选。首先,本课题利用云南省主要流行的7型GBV-C毒株,经PCR扩增、酶切、连接、转化技术构建了 GBV-C八个诱饵载体（GBV-C E1/E2/NS2/NS3/NS4/NS5/NS5A 85aa）,并通过双酶切和测序验证八个载体均构建成功。其次,本课题通过在营养缺陷型培养基进行选择培养,验证了构建成功的八个诱饵载体酵母菌Y2H中除pGBKT7-NS5A 85aa外均无自激活作用,且对酵母菌Y2H不产生毒性,适用于第四代Gold酵母双杂交系统。最后,以自激活及毒性验证成功的诱饵载体为诱饵,利用SD各种缺陷性培养基对T细胞cDNA基因文库蛋白进行筛选,共获得与GBV-C-E1/E2/NS2作用蛋白的阳性克隆10个,回返验证及反式自激活验证均成功。测序结果通过NCBI Blast比对后发现这10个克隆含有三个cDNA序列,分别为1种与GBV-C E1相互作用的蛋白,线粒体蛋白ATP6-4;2种与GBV-C E2相互作用的蛋白,为淋巴毒素α（LT-α）和cAMP-依赖性蛋白激酶（PRKAR1）;1种与GBV-C NS2相互作用的蛋白,为cAMP-依赖性蛋白激酶（PRKAR1）。GBV-C NS3/NS4/NS5 未筛选到阳性克隆。本研究通过酵母双杂交实验初步筛选到了GBV-C E1、E2、NS2蛋白相互作用的三种蛋白,三种蛋白均未被报道过,这就为下一步研究GBV-C与HIV相互作用的机制在T淋巴细胞水平上打下了坚实的基础。