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帕金森病(Parkinson’S disease,PD)是55岁以上老年人常见的慢性、进行性神经退行性疾病,严重影响人类的健康水平和生活质量。PD的主要病理及生化改变为黑质-纹状体通路的DA能神经元退行性变、Lewy’s小体的出现以及纹状体DA含量的绝对减少。但是,对于导致DA神经元变性、死亡的机制目前还不清楚。在已经提出的众多学说中,氧化应激、兴奋性毒性、线粒体功能障碍是导致DA能神经元死亡最主要的三个机制。谷氨酸(glutamate,Glu)是中枢神经系统内的一种重要的兴奋性神经递质。但是,各种病理因素导致的细胞外Glu浓度过高,过度激活Glu受体而产生兴奋性神经毒性,是PD的一个重要发病机制。 神经胶质细胞在PD等神经退行性病的发生、发展过程中发挥重要的作用。本文研究工作探讨了激动星形胶质细胞上的Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)的激活是否具有保护中脑神经元的作用;鉴于神经胶质细胞上的高亲和力Glu转运体(Glutamate transporters,GluTs)的主动摄取是清除胞外Glu的主要途径,本文工作进而探讨这种保护作用是否与促进星形胶质细胞摄取Glu有关;在此基础上,研究C6星形胶质瘤细胞株上mGluRs的表达情况及其配基对Glu摄取的调节作用,探索mGluRs配基调节作用的生物学物质基础,进一步佐证在星形胶质细胞上研究获得的结论。体外培养中脑神经元,用Annexin V法检测细胞凋亡率,研究发现,直接给予Mpp~+(150 μM)并不能使中脑神经元的凋亡率明显增加,而经Mpp~+(150 μM)处理的星形胶质细胞的培养基明显促进神经元凋亡;预先用Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂DCG-IV和L-AP4与神经元预孵育,并不能降低中脑神经元的凋亡率,但是DCG-IV和L-AP4与星形胶质细胞预孵育制备的条件培养基可以明显降低中脑南京医科人学硕1:学位沦文神经元的凋亡率,这种作用可被11、JIl组mGluRS拮抗剂APICA和MSOP所拮杭。研究结果提示选择性激活星形胶质细胞上11、m组mGluRS可保护中脑神经元免受MPP+活化星形胶质细胞产生的毒性作用。为了阐明其机制,应用同位素标记法检测DCG一w和L一AP4对MPP+抑制星形胶质细胞摄取Glu的影响。研究发现,DCG一IV和L一AP4均能逆转MPP+引起的Glu摄取抑制,并且这种逆转作用可分别被H和111组mGluRS拮杭剂APICA和MSOP所拮抗。应用免疫细胞化学和免疫印迹法的研究发现:C6细胞表达mGluRI、2/3、4、6、7,DCG一W和L一AP4可调节C6细胞摄取Glu,进一步佐证了在星形胶质细胞上研究获得的研究结果。 总之,本文研究工作首次报道了激动星形胶质细胞上的11、m组mGluRS可以通过促进星形胶质细胞摄取Glu而保护中脑神经元免受MpP+活化星形月免质细胞导致的神经毒性作用,并在学术界首次发现C6胶质瘤细胞上存在mGluRI、2/3、4、6、7。这些研究结果为阐明神经月免质细胞上的mGluRS与PD发生、发展的相关性及进一步探索PD的病因学、研制新一代治疗PD的药物积累了学术基础。