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为了阐明(1)水牛卵泡组织在不同阶段发生闭锁退化的原因,(2)水牛健康优势卵泡(HDF)和闭锁优势卵泡(ADF)中颗粒细胞(GC)的生物学特征,(3)卵泡GC和腔前卵泡体外培养的死亡特征,(4)维生素C(VC)、N-乙酰半胱氨酸(NAC)、过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)几种抗氧化剂以及氧化剂过氧化氢(H2O2)对体外培养的水牛卵泡GC的影响,本研究进行了下列实验并取得相应的结果:(1)采用5月龄水牛胎犊、初情期前水牛、和成年繁殖期水牛的卵巢进行了HE染色的组织学观察和DNA原位末端标记(TUNEL)检测,发现5月龄水牛胎犊卵巢皮质部的大量腔前卵泡中广泛存在着卵泡细胞凋亡和某些卵母细胞凋亡;凋亡的方式以活细胞间散在的单个细胞凋亡为主。发情期前水牛卵巢上除缺乏成熟卵泡外,其余卵泡与成年繁殖期水牛的相同。综合HE染色、TUNEL检查和透射电镜检查结果,水牛有腔卵泡颗粒细胞凋亡的方式有两类:其一是GC层中的细胞凋亡多以单个细胞凋亡方式出现,即GC发生核浓缩,或细胞内出现多个凋亡小体;其二是脱落于卵泡腔内的GC和GC层腔内缘的GC发生凋亡,表现为卵泡腔内出现许多凋亡小体。有的凋亡小体明显来自多个细胞核的汇集,体积可大于健康GC,形态各异。(2)成年间情期水牛的HDF和ADF中都存在着凋亡GC,HDF中凋亡的GC比例较ADF的低;凋亡GC具有体积缩小、核浓缩的HE染色特征和荧光检查特征。卵泡液中GC的DNA电泳显示HDF的细胞DNA呈完整条带,而ADF的存在着降解的小分子量DNA碎片,呈“抹片状”带。FCM检查水牛闭锁早期DF的GC,发现凋亡的GC较少,在G0/G1期峰前存在另一DNA降解峰。综合DNA电泳和FCM检测结果,水牛ADF中GC的DNA降解是以随机降解为主的。(3)血清撤除诱发体外培养的水牛卵泡GC死亡,经HE染色光镜检查与TUNEL法检查共同证实为凋亡。超微结构检查证实,血清撤除可诱发体外培养的水牛腔前卵泡发生细胞凋亡,包括卵母细胞凋亡和卵泡细胞凋亡。腔前卵泡细胞凋亡的超微结构特征是,卵母细胞的细胞核碎裂成块状,电子密度增高;卵泡细胞凋亡时,在原位出现典型的螺层样的内质网结构。(4)VC、NAC、SOD、CAT抗氧化剂以及氧化剂H2O2在低浓度时对血清撤除诱发的水牛卵泡GC凋亡有抑制作用,高浓度时降低GC存活率。 这些结果提示,卵泡GC凋亡参与水牛卵泡闭锁,此现象从母水牛胎儿期开始直到成年都普遍存在。水牛卵泡闭锁过程中卵泡GC既存在着细胞凋亡,又存在着坏死。腔前卵泡和卵泡GC的体外培养容易发生细胞凋亡,适量的抗氧化剂可提高细胞存活率。