骨髓腔补液对创伤失血性休克小鼠免疫功能的影响

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目的通过检测骨髓与肾脏免疫细胞数量以及骨髓和肾脏中调节性树突细胞(CD11c-CD45RBhighDCs)数量的变化,来探讨骨髓腔补液对创伤失血性休克小鼠免疫状态的影响及其机制。方法初将C57BL/6小鼠分为脓毒症模型组、创伤失血性休克+致脓毒症模型组、创伤失血性休克+脓毒症模型+25μL/g生理盐水组、创伤失血性休克+脓毒症模型+50μL/g生理盐水组。分别对上述分组进行死亡率的观察。上述实验组小鼠分别于实验的第0、3、7、14天处死,并取骨髓和肾脏组织,再经过研磨、离心、重悬和细胞计数对小鼠的免疫状态进行分析。流式细胞仪用于确定树突细胞表型的变化并确定CD11c-CD45RBhigh DCs的数量变化。分别在创伤失血性休克前、创伤失血性休克后10min和骨髓腔补液后这三个时间点,通过摘眼球取血和离心获取血浆,然后用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术测定血浆中TNF-α和IL-10浓度变化。应用小鼠树突细胞富集试剂盒和免疫磁珠细胞分选仪进行骨髓和肾脏中CD11c-CD45RBhighDCs的纯化与提取。取第0、7天获得的骨髓和肾脏中的免疫细胞以及CD11c-CD45RBhighDCs,分别以骨髓细胞(106和107)、肾脏细胞(106和107)、骨髓中CD11c-CD45RBhighDC(105和5×105)和肾脏中CD11c-CD45RBhighDC(105和2×105)剂量以腹腔注射的方式回输到脓毒症小鼠体内,观察死亡率变化。结果1骨髓腔补液能够明显降低创伤失血性休克合并脓毒症小鼠的死亡率(P<0.05)。创伤失血性休克能稍微降低受到致死菌攻击的小鼠的死亡率,但是较进行骨髓腔补液组不明显(P<0.05)。2骨髓腔补液通过提高TNF-α的量促进骨髓的增殖与分化,并加速骨髓免疫细胞向外周器官迁移。3给予骨髓腔补液治疗后,小鼠得骨髓和肾脏的免疫细胞以及骨髓和肾脏中的CD11c-CD45RBhighDCs都有显著的增高,升高的幅度在一定范围内随着补液量增大而增大(P<0.05)。4 CD11c-CD45RBhighDCs的回输比骨髓和肾脏中的免疫细胞的回输更能降低脓毒症小鼠的死亡率(P<0.05)。结论骨髓腔补液能够迅速补充机体的血容量,促进骨髓增殖分化为CD11c-CD45RBhighDCs,进而增强由创伤失血性休克激活的先天免疫的保护作用,也正是因为CD11c-CD45RBhighDCs数量的激增和向灌注不足的肾脏中迁移聚集,有效地预防了脓毒症和AKI等并发症的发生且降低了创伤失血性休克小鼠的死亡率。图8幅;表1个;参231篇。
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