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研究背景当发生急性心肌梗死(AMI)时及时给予再灌注治疗是减少梗死面积的最有效的方法,但当缺血心肌恢复血供后,可能会引起局部心肌组织的损伤或其他心功能异常,导致心肌缺血-再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),研究已证实MIRI有细胞焦亡的参与,细胞焦亡主要依赖于NLRP3炎症小体的激活,激活后的NLRP3通过ASC的募集来激活caspase-1,caspase-1通过切割前体IL-18和IL-1β(pro-IL-18 pro-IL-1β)形成有活性IL-18和IL-1β,并将其释放,产生炎症反应。曲美他嗪可通过抑制凋亡、炎症反应、自噬等多种机制发挥对缺血心肌的保护作用,但关于曲美他嗪对细胞焦亡的影响的研究较少。目的明确缺氧/复氧处理的H9C2细胞是否有细胞焦亡的发生;探讨曲美他嗪能否通过抑制细胞焦亡从而达到对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的保护作用。它为MIRI的治疗提供了新的思路和治疗靶点。方法通过对H9C2细胞行缺氧12h/复氧4h处理来模拟大鼠MIRI;将心肌细胞随机分为5组:正常对照组、缺氧/复氧组(hypoxia/Reoxygenation group,H/R组)、缺氧/复氧+曲美他嗪50μmol/L组(hypoxia/Reoxygenation+trimetazidine50μmol/L group,H/R+TMZ 50μmol/L组)、缺氧/复氧+曲美他嗪100μmol/L组(hypoxia/Reoxygenation+trimetazidine100μmol/L group,H/R+TM-Z100μmol/L组)、缺氧/复氧+曲美他嗪500μmol/L组(hypoxia/Reoxyg-enation+trimetazidine 500μmol/L group,H/R+TMZ500μmol/L组)。用CKK8法检测各组心肌细胞活性;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测每组LDH的活性;免疫印迹(western blot)法检测实验各组心肌细胞中caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平的变化;荧光定量PCR方法用于检测各组心肌细胞中caspase-1、ASC和NLRP3 mRNA的相对表达量。结果1.5组心肌细胞活力的比较:与正常对照组(144.3±5.6)相比,H/R组心肌细胞活性(50.1±4.9)显著降低(P<0.05);与H/R组相比,H/R+TMZ 50μmol/L组(77.2±3.7)、H/R+TMZ 100μmol/L组(103.4±15.4)、H/R+TMZ 500μmol/L组(77.6±1.3)细胞活力均显著增加(P<0.05),其中H/R+TMZ 100μmol/L组增加最明显。2.5组心肌细胞LDH漏出量的比较:与正常对照组相比,H/R组心肌细胞LDH漏出量显著增多(P<0.05);与H/R组心肌细胞相比,行不同浓度曲美他嗪预处理后,再行H/R处理的H9C2细胞LDH漏出量有所下降(P<0.05)。3.曲美他嗪对细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA表达的影响:与正常对照组相比,H/R组Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA的表达上调,与H/R组相比,经过不同浓度曲美他嗪预处理的三组Caspase-1、NLRP3、ASC mRNA的表达均下降,具有统计学差异,并且在100μmol/L曲美他嗪预处理组下降最为明显。4.曲美他嗪对H/R心肌细胞细胞焦亡相关蛋白表达的影响:与正常对照组相比,H/R组Caspase-1、NLRP3、ASC蛋白的表达升高,与H/R组相比,经过不同浓度曲美他嗪预处理的三组细胞Caspase-1、NLRP3、ASC蛋白的表达降低,具有统计学差异,并且在100μmol/L曲美他嗪预处理组降低最为明显。结论1.缺氧/复氧导致的心肌细胞损伤有细胞焦亡的参与;2.曲美他嗪可通过抑制细胞焦亡减轻心肌细胞缺血再灌注损伤;3.曲美他嗪处理心肌细胞的最适浓度为100μmol/L。