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苦参碱是从豆科植物苦参的干燥根、植株、果实中提取的一种生物碱。目前关于苦参碱在抑菌、抗炎方面有较多报道。同时,苦参碱在临床上具有治疗肺癌、鼻咽癌和肝癌等肿瘤的作用。但是,关于苦参碱对滤泡状甲状腺癌的作用未见报道,本研究旨在探讨苦参碱对滤泡状甲状腺癌的作用及其潜在机制。
本实验以滤泡状甲状腺癌FTC-133细胞为试材,用终浓度为0、40、80、200和400μmol/L的苦参碱分别处理FTC-133细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力,结果表明苦参碱以剂量和时间依赖的方式抑制甲状腺癌FTC-133细胞生长,IC50值为154.8μmol/L。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,结果表明苦参碱能够诱导FTC-133细胞凋亡并且阻滞周期于G1/S期。倒置显微镜检测细胞形态和细胞迁移率,发现苦参碱作用后细胞形态发生改变,呈现凋亡状态,同时,FTC-133细胞迁移能力受到明显抑制。
应用qRT-PCR检测miR-21表达量以及PTEN和Akt的mRNA水平表达量;Westernblotting检测PTEN、Akt和pAkt的表达量。结果表明苦参碱显著下调miR-21的表达量,上调PTEN表达量,下调pAkt表达量,但对Akt的表达量无明显影响。细胞分别转染终浓度为30nM和50nM的miR-21mimic和miR-21inhibitor后,qRT-PCR检测miR-21表达量以及PTEN和Akt的mRNA水平表达量,Westernblotting检测PTEN、Akt和pAkt的表达量。细胞转染miR-21mimic后,细胞内miR-21表达量增多,PTEN表达量在mRNA和蛋白质水平均减少,pAkt表达量增多,Akt表达量无明显变化。细胞转染miR-21inhibitor后,细胞内miR-21表达量减少,PTEN表达量在mRNA和蛋白质水平均增多,pAkt表达量减少,Akt表达量无明显变化。以上结果说明苦参碱通过miR-21调节PTEN的表达水平抑制FTC-133细胞的增殖。
苦参碱处理FTC-133细胞后,应用Westernblotting检测Bcl-2、Caspase-3和Cleavedcaspase-3的表达量。结果表明Bcl-2的表达量下调,Cleavedcaspase-3的表达量上调。初步证明苦参碱诱导FTC-133凋亡涉及Caspase依赖的线粒体凋亡途径。
本研究表明苦参碱通过miR-21介导的PTEN/Akt信号通路抑制滤泡状甲状腺癌细胞FTC-133的增殖。同时,苦参碱诱导FTC-133凋亡涉及Caspase依赖的线粒体凋亡途径。此外,研究表明苦参碱可能成为一种治疗滤泡状甲状腺癌的潜在药物,miR-21可能成为治疗滤泡状甲状腺癌的潜在靶点。总之,本研究为滤泡状甲状腺癌的药物开发和治疗提供了一定的理论和实验基础。
本实验以滤泡状甲状腺癌FTC-133细胞为试材,用终浓度为0、40、80、200和400μmol/L的苦参碱分别处理FTC-133细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力,结果表明苦参碱以剂量和时间依赖的方式抑制甲状腺癌FTC-133细胞生长,IC50值为154.8μmol/L。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,结果表明苦参碱能够诱导FTC-133细胞凋亡并且阻滞周期于G1/S期。倒置显微镜检测细胞形态和细胞迁移率,发现苦参碱作用后细胞形态发生改变,呈现凋亡状态,同时,FTC-133细胞迁移能力受到明显抑制。
应用qRT-PCR检测miR-21表达量以及PTEN和Akt的mRNA水平表达量;Westernblotting检测PTEN、Akt和pAkt的表达量。结果表明苦参碱显著下调miR-21的表达量,上调PTEN表达量,下调pAkt表达量,但对Akt的表达量无明显影响。细胞分别转染终浓度为30nM和50nM的miR-21mimic和miR-21inhibitor后,qRT-PCR检测miR-21表达量以及PTEN和Akt的mRNA水平表达量,Westernblotting检测PTEN、Akt和pAkt的表达量。细胞转染miR-21mimic后,细胞内miR-21表达量增多,PTEN表达量在mRNA和蛋白质水平均减少,pAkt表达量增多,Akt表达量无明显变化。细胞转染miR-21inhibitor后,细胞内miR-21表达量减少,PTEN表达量在mRNA和蛋白质水平均增多,pAkt表达量减少,Akt表达量无明显变化。以上结果说明苦参碱通过miR-21调节PTEN的表达水平抑制FTC-133细胞的增殖。
苦参碱处理FTC-133细胞后,应用Westernblotting检测Bcl-2、Caspase-3和Cleavedcaspase-3的表达量。结果表明Bcl-2的表达量下调,Cleavedcaspase-3的表达量上调。初步证明苦参碱诱导FTC-133凋亡涉及Caspase依赖的线粒体凋亡途径。
本研究表明苦参碱通过miR-21介导的PTEN/Akt信号通路抑制滤泡状甲状腺癌细胞FTC-133的增殖。同时,苦参碱诱导FTC-133凋亡涉及Caspase依赖的线粒体凋亡途径。此外,研究表明苦参碱可能成为一种治疗滤泡状甲状腺癌的潜在药物,miR-21可能成为治疗滤泡状甲状腺癌的潜在靶点。总之,本研究为滤泡状甲状腺癌的药物开发和治疗提供了一定的理论和实验基础。