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背景:由于关节软骨中无血管、神经和淋巴分布的自身特点,故一旦损伤关节软骨,其自身修复的能力往往十分有限。虽然多种软骨损伤治疗手段己被应用于临床,但仍缺少一个有效的治疗方法,而SMSCs因具有取材方便、创伤小、细胞量大等优点,是软骨损伤修复的研究中最被关注的细胞之一。而部分lncRNAs在表观转录水平、翻译水平、蛋白修饰过程和遗传水平中,均发挥着重要的调控作用。而探究lncRNA在促进SMSCs增殖与分化方面的研究却报道甚少。目的:探究lncRNA DANCR促进SMSCs增殖和向软骨细胞分化的作用机制。方法:取健康的新西兰大白兔,于动物手术室获取兔膝关节滑膜,转运至超净台中,仔细消化分离得到SMSCs;并通过有限稀释法进行纯化后,在体外培养扩增SMSCs,取第3代SMSCs在一定条件下分别行成脂、成骨、成软骨诱导,验证其多向分化能力。通过构建过表达DANCR-SMSCs,利用CCK-8、甲苯胺蓝染色、qRT-PCR等验证DANCR在SMSCs的细胞增殖、组织学染色、软骨特异性基因的表达情况。进一步通过构建质粒,慢病毒转染,siRNA的转染等构建相应的目的基因;同时,我们通过BLAST数据库分析发现,DANCR与myc,STAT3和Smad3之间存在高度互补的区间,再通过qRT-PCR和RNA免疫沉淀等方法验证DANCR与myc,STAT3和Smad3之间是否存在相关性,以及进一步探究myc,Smad3和STAT3在SMSCs向软骨细胞增殖与分化过程中的具体作用机制结果:从兔膝关节滑膜中培养获取的SMSCs,其细胞形态大致均一,细胞呈梭形分布;在一定诱导培养条件下,SMSCs可以向成软骨、成骨、成脂等不同方向分化,体外诱导培养证明了 SMSCs具有多向分化的潜力;CCK-8结果显示:DANCR-SMSCs过表达组的细胞增殖速度显著快于Vector-SMSCs对照组,提示DANCR的过表达可增强SMSCs的细胞增殖;甲苯胺蓝染色结果显示:DANCR-SMSCs过表达组的细胞染色更加地显著;qRT-PCR结果提示成软骨诱导14天后,过表达DANCR-SMSCs的软骨特异性基因-Ⅱ型胶原(Type Ⅱcollagen)、蛋白多糖(Aggrecan)、SOX9基因的表达显著增加。RIP-qPCR检测证明DANCR和myc,STAT3和Smad3 mRNA的表达密切相关,并能特异性的增强其稳定性;进一步验证发现,DANCR通过靶向作用于myc,从而增强SMSCs的细胞增殖;而DANCR通过靶向作用于STAT3和Smad3,从而促进SMSCs向软骨细胞分化。结论:实验结果表明,体外培养的SMSCs细胞形态均一,呈梭形分布,并具有多向分化的能力;DANCR可促进SMSCs的细胞增殖及向软骨细胞诱导分化,并且软骨细胞特异性基因的表达显著增加;进一步验证发现,DANCR通过靶向作用于myc增强SMSCs的细胞增殖;通过靶向作用于STAT3和Smad3而促进SMSCs向软骨细胞分化。