【摘 要】
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背景和目的:原发性肝癌（简称肝癌）和糖尿病都是临床上常见的疾病,研究表明糖尿病患者因糖代谢紊乱,长期高糖环境可以促进肝癌进展,糖尿病是肝癌发展的重要危险因素之一。既往研究发现E2启动结合因子1（E2F transcription factor 1,E2F1）在高糖环境中表达升高,并且可以促进肝脏肿瘤的进展。在肿瘤发展机制中的上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transi
【基金项目】
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项目名称:高糖、高脂条件下肝癌细胞的E2F1与EMT表达的关系研究,项目合同编号:2017GXNSFAA198097,项目来源:广西自然科学基金项目,项目起止时间:2017年7月-2020年6月
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背景和目的:原发性肝癌（简称肝癌）和糖尿病都是临床上常见的疾病,研究表明糖尿病患者因糖代谢紊乱,长期高糖环境可以促进肝癌进展,糖尿病是肝癌发展的重要危险因素之一。既往研究发现E2启动结合因子1（E2F transcription factor 1,E2F1）在高糖环境中表达升高,并且可以促进肝脏肿瘤的进展。在肿瘤发展机制中的上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）可以使肿瘤细胞在某些环境中向间质性的表型改变,是肿瘤转移的重要动力和早期标志。大量研究表明,高糖是细胞发生EMT的重要因素之一,而高糖条件下肝癌细胞E2F1与EMT之间的关系仍不清楚。因此,本研究在高糖促进E2F1高表达的基础上探讨E2F1与肝癌细胞EMT的相关关系,并初步探索可能的分子机制。方法:1.观察高糖条件下Huh-7肝癌细胞的功能变化:根据培养基所含糖浓度分为对照组（糖浓度为5.5mmol/L）和高糖组（糖浓度为25mmol/L）,分别作用于Huh-7肝癌细胞。采用CCK-8试验比较两组细胞的增殖能力;用Transwell侵袭试验和划痕试验分别比较两组细胞的侵袭和迁移能力。2.探讨高糖条件下Huh-7肝癌细胞E2F1与EMT相关标志物的表达情况:分为对照组和高糖组分别培养细胞至48小时,采用Western Blot的实验方法检测两组细胞E2F1及EMT相关标志物（E-cadherin、Vimentin、α-SMA）的蛋白表达;用qPCR的实验方法检测两组细胞中E2F1及E-cadherin、Vimentin、α-SMA的mRNA水平。3.探讨高糖条件下E2F1对Huh-7肝癌细胞EMT的影响:高糖条件下培养细胞,瞬时转染siRNA-E2F1和Negative Control siRNA,分别记为HG+SIE组和HG+NC组。转染48小时后用Western Blot和qPCR的实验方法验证E2F1的沉默效率,采用Transwell侵袭和迁移试验分别比较转染后两组细胞的侵袭和迁移能力;最后检测E-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达情况。4.探讨β-catenin的表达与E2F1促进Huh-7肝癌细胞EMT的关系:分别采用Western Blot和qPCR观察高糖促进肝癌细胞EMT时β-catenin的表达变化。当细胞转染siRNA-E2F1和Negative Control siRNA后,再次用Western Blot和qPCR检测两组细胞β-catenin的表达。结果:1.高糖条件下Huh-7肝癌细胞的增殖能力较强,细胞的侵袭迁移能力增加。在不同糖浓度培养基作用于Huh-7肝癌细胞后,CCK-8试验结果显示对照组细胞在0h、24h、48h、72h时吸光度值分别为:0.174±0.002、0.417±0.015、0.714±0.007和1.392±0.034,高糖组细胞分别为0.178±0.003、0.512±0.013、0.797±0.027和1.473±0.014,对比两组细胞,高糖组细胞的增殖能力较强（P0.05）。结论:1.高糖条件下可通过上调E2F1增强Huh-7肝癌细胞的增殖能力,并且促进细胞发生EMT。2.高糖条件下可促进Huh-7细胞β-catenin表达。
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