目无胆甾原体（Acholeplasma oculi）是引起绵羊和山羊传染性角膜结膜炎的病原,是羊的11种主要致病性支原体之一。羊传染性角膜结膜炎是一种急性接触传染性病,其特征是结膜和角膜发炎,往往引起暂时的或永久的视觉缺失。本试验意在分离鉴定一株目无胆甾原体,并提取目无胆甾原体的外膜蛋白（OMP）,对其外膜蛋白进行免疫原性和免疫保护性研究,本研究对于羊目无胆甾原体疫病的防治具有重要的基础意义。本研究共分为两部分:1、目无胆甾原体分离鉴定本试验在四川雅安某羊场分离出一株目无胆甾原体,通过形态学观察,生长特性,生化鉴定后初步确定为目无胆甾原体;通过设计一对通用引物,对目无胆甾原体的16srRNA保守序列进行体外扩增,比对基因序列,从而对目无胆甾原体进行基因水平的鉴定,确定该分离株为目无胆甾原体。通过目无胆甾原体对小鼠的致病性试验,可知本病原确能引起角膜结膜炎。2、目无胆甾原体外膜蛋白研究采用Triton-X裂解和0.6%KI的提取方法成功提取目无胆甾原体OMP,通过对目无胆甾原体OMP的SDS-PAGE分析,确定其分子量范围在20KD-114KD之间,主要有5种多肽组成,且均为菌体蛋白的成分;Western-blotting结果表明大小为为114KD,110KD,70KD,57KD的四种多肽具有免疫原性;使用OMP对家兔进行免疫,通过间接ELISA测定抗体水平变化,结果表明OMP能够诱导动物机体产生高效价的抗体,免疫7天,14天,28天后血清效价分别为1:24^4.18,1:2^6.84,1:2^8.56;且该抗体可识别全菌抗原,抗全菌高免血清也可识别外膜蛋白抗原;利用MTT法对外膜蛋白引起的细胞免疫功能进行测定,结果显示外膜蛋白具有特异性致淋巴细胞有丝分裂作用,免疫后7天,14天,21天,28天淋巴细胞转化率分别为10.95%,13.91%,16.71%,18.34%,表明外膜蛋白具有免疫原性和反应原性,既可引起动物机体的体液免疫,也可引起动物机体的细胞免疫;通过对目无胆甾原体外膜蛋白保护性研究,接种外膜蛋白高免血清可以抑制该病原的致病作用,使用外膜蛋白免疫动物可以引起动物特异性免疫应答,获得免疫记忆,抵抗病原感染,这表明外膜蛋白在免疫防治中被动免疫和主动免疫都具有较高的保护力,是良好的免疫原,可以用于制作亚单位疫苗。