中华绒螯蟹中氟苯尼考的检测技术及其药物代谢动力学研究

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氟苯尼考是新一代氯霉素类兽用合成抗生素,但目前包括药物动力学、风险评估等方面的研究比较薄弱,往往造成盲目用药,不但影响治疗效果,而且易造成药物残留,影响水产品质量安全,对水产业的稳定、健康发展造成很大影响。中华绒鳌蟹产业在我国具有较大的发展前景,所以有必要对氟苯尼考在中华绒螯蟹中的检测方法和药物代谢动力学进行相关基础性研究,所以本文主要研究内容分为以下几个部分:(1)水产品中氟苯尼考残留的检测方法研究;(2)给药剂量对氟苯尼考在中华绒鳌蟹体内的药物代谢动力学影响的研究;(3)水温对氟苯尼考在中华绒鳌蟹体内的药物代谢动力学影响的研究,具体如下:1.建立了水产品中氟苯尼考残留的检测方法。高效液相色谱-荧光法以乙酸乙酯为提取溶液,C18固相萃取柱为净化柱,采用Agilent TC-C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以10mmol·L-1乙酸铵缓冲液(pH3.5)和乙腈为流动相(体积比55:45),荧光检测激发波长为225nm,发射波长为280nm。结果显示,氟苯尼考在0.1~5μg·mL-1范围内与峰面积呈线性相关,相关系数为0.9999。当空白样品中氟苯尼考添加水平为40~1000μg·kg-1时,该方法的回收率为88.6%~95.4%,相对标准偏差为3.51%~8.28%,检出限为5.6μg·kg"1。液-质联用法以乙酸乙酯为提取溶液,流动相为甲醇和水,采用ESI负离子扫描,选择反应监测(SRM)模式检测,结果显示,氟苯尼考在1~100ng·mL-1范围内与峰面积呈线性相关,相关系数大于0.999。测定的回收率为86.6%~90.5%,相对标准偏差为5.21%~7.28%。同时比较了两种方法的优缺点,为水产品中氟苯尼考残留量的检测提供一定的技术参考。2.研究不同剂量氟苯尼考在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉和肝脏组织中的代谢规律和组织分布的影响。在17℃水温下,按5.0、10.0、20.Omg·kg-1剂量单次肌肉注射给药,高效液相色谱法-荧光法测定中华绒螯蟹血淋巴、肌肉和肝脏中药物残留浓度,试验结果采用Origin8.0数据处理软件绘制药物浓度-时间曲线,利用3P97药代动力学软件分析数据。研究结果表明,在3种给药剂量下,血淋巴和肌肉组织中氟苯尼考含量瞬时达到峰值,而肝脏中氟苯尼考含量则随给药时间,先上升后下降,各组织含量从大到小依次为:肌肉、血淋巴、肝脏。应用药代动力学计算软件3P97分析结果表明:血淋巴、肌肉、肝脏组织中氟苯尼考的代谢规律均符合二室开放模型,主要药代动力学参数:血淋巴中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)和消除半衰期(T1/2β)分别为0.04、0.21、0.87h和0.60、1.48、3.29h,整体清除率(CLs)分别是2.17、1.99和2.12mL·kg-1·h-1,肌肉中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)和消除半衰期(T1/2β)分别是1.38、0.93、0.47h和10.39、31.78、23.91h,整体清除率(CLs)分别是0.07、0.03、0.03mL·kg-1·h-1,肝脏中氟苯尼考的吸收半衰期(T1/2α)和消除半衰期(T1/2β)分别是0.69、0.07、0.12h和0.73、4.90、4.49h,整体清除率(CLs)分别是1.79、2.55、3.89mL·kg-1·h-1。3.研究不同水温(17℃和28℃)条件下,单剂量(5mg·kg-1)肌肉注射氟苯尼考,在中华绒鳌蟹体内药代动力学。高效液相色谱法-荧光法测定中华绒螯蟹血淋巴、肌肉和肝脏中药物残留浓度,试验结果采用Origin8.0数据处理软件绘制药物浓度-时间曲线,利用3P97药代动力学软件分析数据。结果表明,中华绒螯蟹各组织中氟苯尼考的代谢规律均符合二室开放模型,17℃组和28℃组血淋巴中的消除半衰期(T1/2β)分别为0.60h和0.41h,药-时曲线下面积(AUC)分别为2.30和1.92mg·mL-1·h,肌肉中T1/2β分别为10.99h和73.89h,AUC分别为69.36和112.58mg·mL-1·h,肝脏中T1/2β分别为0.73h和20.57h,AUC分别为2.79和11.65mg·mL-1·h,低温组血淋巴中的T1/2β长于高温组,而低温组肌肉和肝脏中的T1/2β却短于高温组;低温组血淋巴中的AUC高于高温组,而低温组肌肉和肝脏中的AUC却低于高温组,结果表明,温度对氟苯尼考在中华绒鳌蟹中各个器官的药代动力学的影响不一样,也足以说明中华绒鳌蟹的代谢机制较复杂。
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