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目的: 研究不同剂量脉宽脉冲染料激光(Pulsed Dye Laser,595nm)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)表达及细胞增殖的影响。初步探究脉冲染料激光治疗瘢痕疙瘩的作用机理。 方法: 以不同能量密度(6J、8J、10J)和脉宽(1.5ms、3ms、10ms)的脉冲染料激光照射体外培养至2~4代的瘢痕疙瘩成纤维细胞,照射后继续培养,设置6个时间点(照光前72小时、24小时、12小时,照光后12小时、24小时、72小时),通过Realtime-PCR和Westernblott测定CTGFmRNA及蛋白的表达,通过CC-K8法检测成纤维细胞的增殖变化,流式细胞仪检测成纤维细胞细胞周期变化及凋亡率,同时设立空白对照组(未照光组)作为比较。 结果: RT-PCR法显示:随着能量密度的增加,激光照射后不同能量组之间的RQ值与对照组之间比较有显著性差异,激光照射后,瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGFmRNA的表达与空白对照组相比,均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),不同能量密度组之间比较,随着激光能量密度的增加,CTGFmRNA的表达抑制越明显,也具有显著性差异(P<0.05),而相同能量密度,不同脉宽组之间,CTGFmRNA的表达,差异无统计学意义(P>0.05); Westernblott法显示:与对照组相比,激光照射后各能量密度组均可以明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF蛋白的表达,有显著性差异(P<0.05),且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的蛋白表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),不同能量密度组之间亦有显著性差异(P<0.05),能量密度越高,抑制越明显,而相同的能量密度,不同的脉宽组之间,无显著性差异(P>0.05);CC-K8法显示,随着能量密度的增加,激光照射后不同能量组之间的OA值与对照组之间比较有显著性差异(P<0.05),均显著降低,不同能量组之间比较也具有显著性差异(t=0.00,P<0.05),能量密度越高,OA值表达越低,且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的OA值表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),而相同能量密度,不同脉宽组之间,差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术显示,在激光照射之前,不同时间点各能量组与对照组相比,瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期比较无显著性差异(P>0.05),激光照射后,随着激光能量密度和时间的增加,处于G1期的细胞较对照组明显增多,而S期的细胞明显减少,细胞的凋亡率也明显增加,差异均有统计学意义P<0.05),在不同能量密度组之间比较时亦有显著性差异(P<0.05),能量密度越高,处于G1期细胞越多,S期的细胞越少,凋亡率越高,而在各相同能量组,不同脉宽组之间比较时差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 在一定的能量范围内,脉冲染料激光可以从翻译和转录水平下调瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF的表达,这种下调作用随能量升高而增强,而可能与脉宽无显著关系;同时可以显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长。