595nm脉冲染料激光对瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子表达及细胞增殖的影响

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangqimeng2008
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目的:  研究不同剂量脉宽脉冲染料激光(Pulsed Dye Laser,595nm)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)表达及细胞增殖的影响。初步探究脉冲染料激光治疗瘢痕疙瘩的作用机理。  方法:  以不同能量密度(6J、8J、10J)和脉宽(1.5ms、3ms、10ms)的脉冲染料激光照射体外培养至2~4代的瘢痕疙瘩成纤维细胞,照射后继续培养,设置6个时间点(照光前72小时、24小时、12小时,照光后12小时、24小时、72小时),通过Realtime-PCR和Westernblott测定CTGFmRNA及蛋白的表达,通过CC-K8法检测成纤维细胞的增殖变化,流式细胞仪检测成纤维细胞细胞周期变化及凋亡率,同时设立空白对照组(未照光组)作为比较。  结果:  RT-PCR法显示:随着能量密度的增加,激光照射后不同能量组之间的RQ值与对照组之间比较有显著性差异,激光照射后,瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGFmRNA的表达与空白对照组相比,均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),不同能量密度组之间比较,随着激光能量密度的增加,CTGFmRNA的表达抑制越明显,也具有显著性差异(P<0.05),而相同能量密度,不同脉宽组之间,CTGFmRNA的表达,差异无统计学意义(P>0.05); Westernblott法显示:与对照组相比,激光照射后各能量密度组均可以明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF蛋白的表达,有显著性差异(P<0.05),且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的蛋白表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),不同能量密度组之间亦有显著性差异(P<0.05),能量密度越高,抑制越明显,而相同的能量密度,不同的脉宽组之间,无显著性差异(P>0.05);CC-K8法显示,随着能量密度的增加,激光照射后不同能量组之间的OA值与对照组之间比较有显著性差异(P<0.05),均显著降低,不同能量组之间比较也具有显著性差异(t=0.00,P<0.05),能量密度越高,OA值表达越低,且激光照射后随着时间的增加,相同参数组各时间点的OA值表达抑制越明显,差异有统计学意义(P<0.05),而相同能量密度,不同脉宽组之间,差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术显示,在激光照射之前,不同时间点各能量组与对照组相比,瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期比较无显著性差异(P>0.05),激光照射后,随着激光能量密度和时间的增加,处于G1期的细胞较对照组明显增多,而S期的细胞明显减少,细胞的凋亡率也明显增加,差异均有统计学意义P<0.05),在不同能量密度组之间比较时亦有显著性差异(P<0.05),能量密度越高,处于G1期细胞越多,S期的细胞越少,凋亡率越高,而在各相同能量组,不同脉宽组之间比较时差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  在一定的能量范围内,脉冲染料激光可以从翻译和转录水平下调瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF的表达,这种下调作用随能量升高而增强,而可能与脉宽无显著关系;同时可以显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长。
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