褐藻作为海洋上丰富的生物质能源,其主要成分是褐藻胶,褐藻胶经过物理法、化学法和酶降解法可以变成褐藻寡糖。褐藻寡糖在食品、医药、化妆品领域有着广泛的应用,因此为了获得优质褐藻寡糖,需要选择污染小、安全性高、绿色的降解途径,而酶降解法既没有物理法的高成本又没有化学法的高污染,所以许多研究人员在寻求一种高效的褐藻胶裂解酶。本论文以研究团队筛选的一株野生型能产褐藻胶裂解酶的溶藻弧菌为出发菌株,通过分子生物学的手段对其进行鉴定,克隆该菌株中褐藻胶裂解酶编码基因,构建褐藻胶裂解酶体外表达重组菌株。对重组菌株进行表达条件优化并纯化得到褐藻胶裂解酶,DNS法测定褐藻胶裂解酶的酶活力,初步研究该酶的酶学性质,为后续大规模生产褐藻胶裂解酶打下基础。主要研究内容如下:（1）通过透明圈实验得到一株产褐藻胶裂解酶的野生型菌株,对其进行16s r DNA测序分析,序列比对后确定该野生型菌株属于溶藻弧菌属（Vibrio alginolyticus ATCC 17749）。借助NCBI数据库通过对该菌株的基因组序列进行分析,查找得到该菌株上一段褐藻胶裂解酶编码基因alg62,其核苷酸长度为1566bp,编码521个氨基酸。通过限制性内切酶Bam HⅠ和XhoⅠ对该序列进行双酶切并与大肠杆菌表达载体p ET28a相连接,成功构建了重组表达载体p ET28a-alg62,将重组载体转化到宿主细胞E.coli BL21中,构建重组E.coli BL21/p ET28a-alg62菌株,之后对其IPTG诱导表达,可以得到可溶性褐藻胶裂解酶。（2）重组菌株的诱导表达条件优化:通过对其诱导温度、诱导时间、诱导剂添加浓度优化之后发现其最适诱导温度为27℃,最佳诱导时间为8 h,最适诱导剂添加浓度为0.8 mmol/L,优化之后粗酶活力达到了81.34 U/m L。对诱导表达之后的菌液进行超声破碎（200 W,工作3 s,间隔5 s,20 min）,经Ni-NTA亲和层析柱纯化,透析除盐,纯化之后测得酶液酶活为131.77 U/m L,蛋白质浓度为1.48 mg/m L,预测蛋白质分子量为61.46 k Da。（3）重组褐藻胶裂解酶的酶学性质的初步研究:结果表明,该酶最适反应温度是30℃,在4℃～50℃之间均能检测到活性。在热稳定性方面,重组酶在20℃～40℃范围内保温30 min后,酶的相对活力仍在80%以上,高于40℃,酶活力急剧下降。酶的最适pH为7.0,在pH6.0～9.0之间,4℃保存24 h后仍有70%的相对酶活性,说明该酶可以在中性和偏碱性环境中稳定存在。在添加终浓度为1 mmol/L的Ca2+、K+后,发现它们对重组酶酶活有促进作用,Cu2+和SDS对酶活有明显的抑制作用。