电化学法检测表皮葡萄球菌活性及抗菌药物的筛选

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目的本课题主要研究表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的电化学行为,以黄嘌呤氧化峰为指标,电化学法检测表皮葡萄球菌活性并对抗菌药物进行评价和筛选,为建立快速、灵敏、简单、无毒且低成本的表皮葡萄球菌电化学检测方法奠定理论和实验基础。方法采用循环伏安法研究表皮葡萄球菌的电化学行为,电化学检测采用三电极体系:多壁碳纳米管修饰玻碳电极(MWCNTs/GCE)为工作电极、饱和银/氯化银电极(Ag/AgCl)为参比电极和铂丝电极(Pt)为对电极。采用电化学法、高效液相色谱法、平板计数法和比浊法对比研究表皮葡萄球菌上清液的氧化峰来源、孵育时间对表皮葡萄球菌活性的影响、表皮葡萄球菌的生长过程以及药物浓度对抗菌药物抑制作用的影响。结果电化学法检测表皮葡萄球菌上清液显现两个信号峰,分别来源于黄嘌呤氧化峰(+0.727 V)和腺嘌呤与次黄嘌呤混合氧化峰(+1.033 V)。在1.9~5.6×10~7CFU·mL-1细菌浓度范围内,黄嘌呤氧化峰峰电流值与表皮葡萄球菌浓度呈现良好的线性关系,线性方程为Y=0.16X+0.28(R~2=0.9940)。当孵育时间超过6 h,表皮葡萄球菌的活性减弱。电化学法以黄嘌呤氧化峰为指标绘制的生长曲线与平板计数法趋势一致,显示出了各个生长阶段的变化特征。采用电化学法检测药物浓度对抗菌活性的影响与平板计数法的检测结果一致。比较硫酸庆大霉素、苯唑西林钠、克林霉素盐酸盐和呋喃妥因对表皮葡萄球菌的抑制作用,结果显示,硫酸庆大霉素对表皮葡萄球菌的抑制作用最强。结论以黄嘌呤氧化峰为指标,电化学法的检测结果与平板计数法一致,并且体现出其相对于其他方法更加灵敏。电化学法可以快速、简便、灵敏、无毒和准确地检测表皮葡萄球菌活性的变化。
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